膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄 儀器 反映這些變化。膜片鉗使用操作流程及注意事項:實驗結束后必須關閉實驗室的水電。金華醫學膜片鉗成像原理
膜片鉗技術基本原理與特點:膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路,將微電極所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態或靜態觀察,從而研究其功能。膜片鉗技術實現膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極邊緣與細胞膜之間形成高阻密封,其阻抗數值可達10~100 GΩ(此密封電阻是指微電極內與細胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高,故基本上可看成絕緣,其上之電流可看成零,形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不光電學上近乎絕緣,在機械上也是較牢固的。金華醫學膜片鉗成像原理全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。
膜片鉗技術是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學上分隔和電極尖開口處相接的細胞膜的小區域(膜片)以及其周圍,在此基礎上固定點位,對這膜片上的離子通道的離子電流(pA級)進行監測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應管運算放大器構成的I-V轉換器。當場效應管運算放大器的正負輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時,因為短路負端子以及膜片都可等電位地達到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時,其間達到Z小的分流電流。
膜片鉗使用的注意事項:1.向玻璃微電極灌注內液時切勿灌太多(1cm左右為適),以防液體進入銀絲底部增加噪聲。2.安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。3.玻璃微電極需先用甲醇浸泡,再用酒精燈微燒兩端,使其平滑。4.換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭,Z適液面為微高于出液口。5.浴槽及灌流系統用畢請及時清洗,防止長菌影響實驗。6.打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。7.干燥季節請先用手觸摸金屬框架釋放身體的靜電。8.每位實驗者請在E盤建立自己的文件夾儲存數據。膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。
膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,記錄數據的過程,都需要細胞保持比較好的活性狀態,才能更加高效的獲得有效數據。因而,膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外,還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數據采集卡、數據記錄和分析系統等。膜片鉗系統有如下應用局限性:大部分的紀錄對象為化細胞,而對于需要貼壁生長的大多數正常細胞。金華醫學膜片鉗成像原理
膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”。金華醫學膜片鉗成像原理
膜片鉗電生理技術:神經元細胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細胞,從而調節神經元激發。一種用于研究這些通道的生物物理學特性的極為有用的技術被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經科學家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過膜的流動。金華醫學膜片鉗成像原理