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蕪湖全自動電生理膜片鉗方案

來源: 發(fā)布時間:2023年08月10日

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:1)細胞吸附式膜片(cell attached patch)是膜片鉗的基本方式,其它方式由此衍生。這種膜片形式比較穩(wěn)定因細胞骨架及有關(guān)代謝過程是完整的,故對細胞結(jié)構(gòu)和環(huán)境干擾比較小。但這種膜片形式易在電極形成囊泡,從而細胞骨架可能有所變化。另外這種膜片不能控制細胞內(nèi)成分。且任何影響膜電位的處理均可影響其電位水平。2)內(nèi)面向外式膜片( inside outpatch)細胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標:軟件的功能全部,可按照操作者設(shè)定的參數(shù)方案自動執(zhí)行實驗。蕪湖全自動電生理膜片鉗方案

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膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過保持細胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來研究整個細胞膜或一大塊細胞膜上所有離子通道活動。目前電壓鉗主要用于巨大細胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細胞表達電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。蕪湖全自動電生理膜片鉗方案膜片鉗使用操作注意:拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時關(guān)閉。

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膜片鉗的應(yīng)用:對單細胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究:將膜片鉗技術(shù)與單細胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈是反應(yīng)技術(shù)結(jié)合,在全細胞膜片鉗記錄下,將單細胞內(nèi)容物或整個細胞(包括細胞膜)吸入電極中,將細胞內(nèi)存在的各種mRNA全部快速逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,再經(jīng)常規(guī)PCR擴增及待檢的特異mRNA的檢測,借此可對形態(tài)相似而電活動不同的結(jié)果做出分子水平的解釋或為單細胞逆轉(zhuǎn)錄多聚酶鏈式反應(yīng)提供標本,為同一結(jié)構(gòu)中形態(tài)非常相似但功能不同的事實提供分子水平的解釋。

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常都需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗?zāi)撤N是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數(shù)據(jù),然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數(shù)據(jù)即可對比數(shù)據(jù)判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設(shè)備固定灌流管進行實驗,經(jīng)常出現(xiàn)灌流管固定不良影響實驗的情況,也有精密的灌流裝置,但是結(jié)構(gòu)復(fù)雜,且成本非常高。膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術(shù)還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。

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膜片鉗技術(shù)之全細胞記錄的優(yōu)點:與傳統(tǒng)的細胞內(nèi)記錄相比,全細胞記錄也有很多好處,比如電極尖銳端開口較大,電阻只2~20MΩ,易于進行電壓/電流鉗制,噪聲很大程度下降,電極電壓降也變得很小,補償非常容易。與單通道記錄相比,單通道記錄無法獲得整個細胞的功能變化信息,而全細胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細胞功能(甚至細胞之間信息傳遞)的改變,加之易于更換細胞外液,所以,全細胞記錄更適用于對離子通道的藥理學(xué)研究,即加各種通道blocker啦,激動劑啦之類的。膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學(xué)必須履行實驗室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作。蕪湖全自動電生理膜片鉗方案

膜片鉗的應(yīng)用:在心血管藥理研究中的應(yīng)用。蕪湖全自動電生理膜片鉗方案

膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用:它是作者在\"膜片鉗技術(shù)及其應(yīng)用\"領(lǐng)域所進行的研究工作的總結(jié),同時也吸取了國際上的先進技術(shù)和新近的研究成果。內(nèi)容包括:細胞電生理與膜片鉗技術(shù),膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術(shù)概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設(shè)計,單通道和全細胞電流記錄技術(shù),數(shù)據(jù)采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術(shù)和安培測量技術(shù),細胞內(nèi)鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術(shù),心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。蕪湖全自動電生理膜片鉗方案

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