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廈門醫學電生理膜片鉗

來源: 發布時間:2023年06月22日

膜片鉗操作實驗:標本制備根據研究目的的不同,可采用不同的細胞組織,如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等,現在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細胞培養法;另外,由于與分子生物學技術的結合,現在也運用分子克隆技術表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。電極在實驗前要灌注電極液,由于電極較細,因此在充灌前,電極內液要用0.2 μm的濾膜進行過濾。一般電極充灌可分灌尖(tipfilling)和后充兩步灌尖時將電極浸入內液中5s即可。膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。廈門醫學電生理膜片鉗

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膜片鉗電生理技術的記錄方式:全細胞記錄法,膜穿孔記錄法(perforatedpatchclamp),巨膜片鉗記錄法(giantmembranepatchclamp),松散封接記錄法(loosepatchclamp)等技術應用:1.為了更換電極內液和從電極內施加藥物,發展了微電極內灌技術(micropipetteperfusiontechnique)2.在研究細胞間的縫隙連接(gapjunction)通路時,發展了雙膜片鉗記錄法(doublepatchrecording)3.將富含神經遞質受體的游離膜片鉗靠近突觸部位,可檢測遞質釋放和突觸活動,這一技術稱為膜片鉗探針技術(detector-patchtechnique)4.將特異的膜片探針插入卵母細胞,可檢測細胞內第二信使含量,此為膜片填塞技術(patchcrammingtechnique)5.為研究細胞的胞吞與胞吐機制,發展了膜電容測定法(membranecapacitancemeasurement)。廈門醫學電生理膜片鉗膜片鉗使用操作注意:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。

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全自動膜片鉗的優勢:自動化:抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化,極大的節約實驗人員的時間精力。簡約化:傳統膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網等全都不需要。效率高:是傳統膜片鉗實驗效率的5-10倍。可靠性:實驗結果輕松復制。經濟實惠:藥物消耗低,每次實驗記錄較低只需5μl內外液體。零技術門檻:無需膜片鉗操作經驗,輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達1GΩ。確保實驗可靠性。兼容性強:可與市場上大多數放大器兼容。應用范圍廣:除擁有傳統膜片鉗功能外,還可以對手動膜片鉗無法涉及的亞細胞結構進行記錄。擴展功能多:配套擴展設備豐富,如內灌流系統、溫度控制系統、脂質體制備器等。

膜片鉗技術與其他生物檢測技術的結合應用:1.膜片鉗與光學顯微成像技術結合應用:利用激光掃描共聚焦顯微鏡、雙光子顯微鏡、熒光顯微鏡等技術可以對細胞進行實時成像研究,將膜片鉗技術與光學顯微成像技術結合使用不但可以檢測細胞的電流變化情況,而且還可以對細胞的電信號傳遞活動進行成像觀察。2.膜片鉗與原子力顯微鏡結合應用:將膜片鉗和AFM結合使用的技術可以提高細胞電生理檢測的分辨率和靈敏度;而且,在獲得細胞電生理信息的同時,還能獲取細胞的生物力學性質,從而更很全地研究細胞的生理功能。膜片鉗的數據如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡。

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膜片鉗在通道研究中的重要作用:應用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程、區分離子通道的離子選擇性、同時可發現新的離子通道及亞型,并能在記錄單細胞電流和全細胞電流的基礎上進一步計算出細胞膜上的通道數和開放概率,還可以用以研究某些胞內或胞外物質對離子通道開閉及通道電流的影響等。同時用于研究細胞信號的跨膜轉導和細胞分泌機制。結合分子克隆和定點突變技術,膜片鉗技術可用于離子通道分子結構與生物學功能關系的研究。膜片鉗實驗要從一大批的實驗數據中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論。廈門醫學電生理膜片鉗

全自動膜片鉗系統技術指標:擴展功能多。配套擴展設備豐富,如內灌流系統、脂質體制備器等。廈門醫學電生理膜片鉗

膜片鉗電生理技術:神經元細胞膜上有離子通道,它們控制電荷流入和流出細胞,從而調節神經元激發。一種用于研究這些通道的生物物理學特性的極為有用的技術被稱為膜片鉗記錄。在這種方法中,神經科學家把拋光的玻璃微吸管置于細胞上通過吸力形成高電阻封接。這個過程分隔了一小"片"包含一種或多種離子通道的膜。通過微吸管中的電極,研究人員可以"鉗制"或控制膜的電屬性,這對分析通道活動很重要。該電極還能記錄跨膜電壓的變化,或離子通過膜的流動。廈門醫學電生理膜片鉗

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