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來源: 發布時間:2024年12月26日

膜片鉗操作實驗:膜片鉗放大器是整個實驗系統中的中心,它可用來作單通道或全細胞記錄,其工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。從原理來說,膜片鉗放大器的探頭電路即I-V變換器有兩種基本結構形式,即電阻反饋式和電容反饋式,前者是一種典型的結構,后者因用反饋電容取代了反饋電阻,降低了噪聲,所以特別適合很低噪聲的單通道記錄。由于供膜片鉗實驗的專門計算機硬件及相應的軟件程序的相繼出現,使得膜片鉗實驗操作簡便、效率提高。如與膜片鉗放大器(內含ITC-16數據采集/接口卡)配套使用的軟件PULSE/PULSEFIT,它既可產生刺激波形,控制數據采集,又可分析數據,同時具有用于膜電容監測的鎖相放大器,多種軟件功能集成于一體。膜片鉗技術的應用范圍:在神經科學中的研究。藥理學腦片膜片鉗網站

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膜片鉗實驗中電極制備之在電極前端涂以硅酮樹脂(sylgard),其目的是為了降低電極與灌流液之間的電容,并形成一個親水界面。經此處理后,上述電容可由6~8pF減少到1pF以下。硅酮樹脂對形成Giga?鄄seals無影響,但可減少本底噪音,對單通道記錄很重要。在進行全細胞記錄時,不用硅酮樹脂也可以得到滿意的效果,通常微電極在涂抹硅酮樹脂后再進行拋光,但較好是在涂抹后一小時內拋光,否則很難改變電極尖銳端的形狀。全自動膜片鉗在藥物篩選中的應用:全自動膜片鉗技術一個重要的應用方向是檢測早期藥物化合物對hERG的毒副作用。hERG通道產生的電流是心室復極中較重要的電流。通道被藥物后抑制直接導致LongQT綜合癥,很可能演變成尖銳端扭轉型室性心動過速,心室纖顫,直至猝死。目前發現幾乎所有的臨床藥物所至的LQT或者TdP都作用于hERG,且導致hERG抑制的藥物在化學結構上沒有明顯的共性,從而很難預測,只有通過實驗的方式給予解決。無錫細胞生物學電生理膜片鉗服務膜片鉗使用操作注意:禁止私拉電線,如有實驗要求可與老師及時溝通。

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膜片鉗技術:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一資有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個的離子通道分子活動的技術。些技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起,同時又將神經科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯系、互不滲透,阻礙人們很全認識能力的弊端。

膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接。膜片鉗技術可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。

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膜片鉗記錄的幾種形式:內面向外膜片(inside-outpatch)高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,使其與細胞分離,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,小泡破裂再回到溶液中就得到“內面向外”膜片。此時膜片兩側的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位,膜電位等于玻管電位的負值。如放大器的電流監視器輸出是非反向的,則輸出將與膜電流(Im)的負值相等。外面向外膜片(out-sidepatch)高阻封接形成后,繼續以負壓抽吸,膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質雙層,此時高阻封接仍然存在。而膜外側面接觸浴槽液。膜片鉗使用的注意事項:換液時應時刻觀察浴槽,防止液面過低或液體溢出污染鏡頭。寧波藥理學離子通道技術

膜片鉗實驗要從一大批的實驗數據中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論。藥理學腦片膜片鉗網站

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數據,然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數據即可對比數據判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設備固定灌流管進行實驗,經常出現灌流管固定不良影響實驗的情況,也有精密的灌流裝置,但是結構復雜,且成本非常高。膜片鉗技術是在電壓鉗技術基礎上發展起來的。藥理學腦片膜片鉗網站

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