膜片鉗實驗的細胞膜型:一個完整的細胞膜電學模型包含幾個基本組分:膜電容,膜電阻和膜電勢。這三個電學組分形成的原因各不相同:1、膜電容(membranecapacitance,Cm)的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層,對離子和其他水溶性物質均不通透,遂使細胞膜成為了電的不良導體,進而導致細胞外液-磷脂雙分子層-細胞內液構成了細胞膜電容。Cm的大小與細胞膜表面積成正比,與磷脂雙分層的厚度成反比。膜電容在這里的作用,主要為完成細胞的充放電過程。2、膜電阻(membraneresistance,Rm)的形成是由于細胞膜上的蛋白質通道,也就是離子通道的存在。離子和小的極性分子只有通過通道才能進出細胞膜,因此膜電阻在這里的作用,主要就是控制離子的進出。3、膜電勢(membranepotential,Vm)又稱膜電位,源自膜內外離子濃度的差異,離子濃度的差異又源于細胞膜對離子的選擇透過性。膜電位一般可分為靜息電位、動作電位和等級電位(不懂的自己去查,此處不贅述)。膜電位的作用主要是維持神經元的興奮性,并改變離子通道的狀態。膜片鉗技術的應用范圍:對離子通道生理與病理作用機制的研究。紹興藥理學膜片鉗實驗
膜片鉗的數據如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規全細胞模式的胞質滲漏問題,有學者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經微電極灌流到含有類甾醇的細胞膜上,形成只允許一價離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導電性孔道,借此對全細胞膜電流進行記錄。由于此模式的胞質滲漏極為緩慢,局部串聯阻抗較常規全細胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細胞模式。它適合于小細胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細胞很難實現鉗位。不足之處是由于電極與細胞間交換快,細胞內環境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質。紹興藥理學膜片鉗實驗膜片鉗使用操作注意:電熱加熱線溫度很高,在使用時注意避免燙傷。
膜片鉗的應用:在心血管藥理研究中的應用:隨著膜片鉗技術在心血管方面的普遍應用,對血管疾病和藥物作用的認識不只得到了不斷更新,而且在其病因學與藥理學方面還形成了許多新的觀點。正如諾貝爾基金會在頒獎時所說:“Neher和Sadmann的貢獻有利于了解不同疾病機理,為研制新的更為有效的藥物開辟了道路”。創新藥物研究與高通量篩選:在離子通道高通量篩選中主要是進行樣品量大、篩選速度占優勢、信息量要求不太高的初級篩選。較近幾年,分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎的兩大主流技術市場。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點與自動化、微量化技術相結合,產生了自動化膜片鉗等一些新技術。
膜片鉗技術——打開細胞電生理之門:定義:膜片鉗技術被稱為研究離子通道的“金標準”,是一種基于電工學和電化學原理的分析手段,可以通過檢測細胞的電信號(電生理性質)來研究化學物質、電、機械力等刺激因素對細胞功能的影響,從而幫助揭示細胞在生命活動中的化學和生物學機制。原理:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極與細胞膜的高阻封接,在電極籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就替代單一離子通道電流。膜片鉗在通道研究中的重要作用:利用膜片鉗技術還可以用于藥物在其靶受體上作用位點的分析。
膜片鉗電生理紀錄系統及記錄方法:細胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升,然后以人工方式對紀錄電極內施加一個負壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升,當紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時,意味著細胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出,之后對電極內壓力施以一個快速的負壓將細胞膜吸破,這樣紀錄電極與細胞胞體之間會形成一個封閉的電容,此時就可以開始對細胞進行實驗。膜片鉗的應用:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位施加各種濃度的藥物來研究。紹興藥理學膜片鉗實驗
膜片鉗使用的注意事項:在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲。紹興藥理學膜片鉗實驗
膜片鉗電生理紀錄系統及記錄方法:膜片鉗技術是用于紀錄全細胞或個別細胞膜上離子信道電生理特性的研究方法,目的在于提供基礎研究知識與新藥開發時研究細胞電特性或小分子藥物對細胞膜上離子信道特性的影響,替開發標靶藥物提供一個測試平臺。傳統的細胞培養膜片鉗系統由人工操作,實驗人員在取得元代細胞(例如心肌細胞與神經元)后,將研究對象細胞養在玻片上,以手動方式將紀錄電極移動放置在胞體上方并壓到細胞膜上,此時紀錄電極在膜外溶液里的電阻大約為3-9 ΜΩ。紹興藥理學膜片鉗實驗
上海司鼎生物科技有限公司是我國免疫印跡(WB)技術服務,熒光定量PCR技術服務,膜片鉗電生理技術服務,在體光纖成像記錄技術服務專業化較早的有限責任公司(自然)之一,公司成立于2016-06-07,旗下司鼎;OriCell,已經具有一定的業內水平。司鼎生物致力于構建醫藥健康自主創新的競爭力,司鼎生物將以精良的技術、優異的產品性能和完善的售后服務,滿足國內外廣大客戶的需求。