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溫州細胞生物學膜片鉗成像原理

來源: 發布時間:2023年05月22日

膜片鉗技術發展至今,已經成為現代細胞電生理的常規方法,它不只可以作為基礎生物醫學研究的工具,而且直接或間接為臨床醫學研究服務,目前膜片鉗技術普遍應用于神經(腦)科學、心血管科學、藥理學、細胞生物學、病理生理學、中醫藥學、植物細胞生理學、運動生理等多學科領域研究。隨著全自動膜片鉗技術(Automaticpatchclamptechnology)的出現,膜片鉗技術因其具有的自動化、高通量特性,在藥物研發、藥物篩選中顯示了強勁的生命力。膜片鉗技術的應用范圍:對離子通道生理與病理作用機制的研究。溫州細胞生物學膜片鉗成像原理

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膜片鉗技術操作方法:實驗前準備:打開總電源及穩壓電源,打開電腦、放大器,并開啟程序軟件,新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果,打開倒置顯微鏡,監視器和微操備用,取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中,置于倒置顯微鏡下,于低倍鏡下尋找狀態良好的細胞,并轉入高倍鏡下再次確認細胞狀態及貼壁情況等,確認細胞后,取電極一根充灌電極內液,彈出氣泡,然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕,用注射器管道給電極一點點正壓,將電極入水,入水后,查案入水電阻,要在4-8M左右的電極才可以使用,通過調節微操,使電極不斷向下接近細胞,待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細胞時停止向下,然后把電極移到細胞上方調節放大器上的調零旋鈕以保證基線在零水平。溫州細胞生物學膜片鉗成像原理膜片鉗使用的注意事項:安裝玻璃微電極時,電極應與銀絲平行,防止刮蹭銀絲電極。

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膜片鉗技術之全細胞記錄的實驗流程:(1)仔細檢查實驗系統各儀器間的線路連接。(2)依次打開各儀器的電源開關和實驗軟件,檢查各參數的初始設置。(3)將樣品置于倒置顯微鏡的載物臺上。(4)電極安裝。(5)偏移電位的補償和電極電阻的測定:在微操縱器控制下使微電極進入浴液,電流基線通常會立刻漂離零位,若此時處于VC模式,在維持電壓為零時,通過調節偏移電位補償,使電流基線等于零,此時可見基線上疊加有響應電流方波。(6)細胞封接。(7)電極電容補償:若無特殊要求,一般將保持電位設為受試細胞靜息電位平均值。

膜片鉗的數據如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達到平衡,該手段在全細胞記錄中普遍應用。膜片鉗操作實驗:膜片鉗實驗難度大、技術要求高,要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實驗數據中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液,如何選擇阻斷劑、激動劑,如何進行正確的數據采集等許多更為復雜的問題,還需在科研實踐中不斷地探索和解決。全自動膜片鉗系統技術指標:軟件的功能全部,可按照操作者設定的參數方案自動執行實驗。

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膜片鉗技術的基本原理和方法:膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ)只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化。膜片鉗使用操作注意:實驗結束后必須關閉實驗室的水電,檢查實驗室門窗。溫州細胞生物學膜片鉗成像原理

膜片鉗使用操作注意:用儀器的同學必須履行實驗室相關要求,完成值日等相關工作。溫州細胞生物學膜片鉗成像原理

膜片鉗記錄的幾種形式:內面向外膜片(inside-out patch) 高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,使其與細胞分離,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,小泡破裂再回到溶液中就得到“內面向外”膜片。此時膜片兩側的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位,膜電位等于玻管電位的負值。如放大器的電流監視器輸出是非反向的,則輸出將與膜電流(Im)的負值相等。外面向外膜片(out-side patch) 高阻封接形成后,繼續以負壓抽吸,膜片破裂再將玻管慢慢地從細胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質雙層,此時高阻封接仍然存在。而膜外側面接觸浴槽液。溫州細胞生物學膜片鉗成像原理

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