一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法:為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響,通常都需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如,需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響,則需要在細胞封接后記錄電流數據,然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數據即可對比數據判斷該對離子通道的影響。以往多采用橡皮泥等簡單設備固定灌流管進行實驗,經常出現灌流管固定不良影響實驗的情況,也有精密的灌流裝置,但是結構復雜,且成本非常高。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細胞膜面積不同,進而所研究的離子通道數目不同。金華神經生物學腦定位膜片鉗原理及步驟
膜片鉗系統(tǒng)有如下應用局限性(1)光能應用于懸浮細胞的紀錄,因此大部分的紀錄對象為化細胞,而對于需要貼壁生長的大多數正常細胞,現有的自動膜片鉗系統(tǒng)就無法紀錄;(2)在紀錄對象上,目前的膜片鉗系統(tǒng)只能紀錄胞膜形狀平整飽滿的細胞,大部分是工具細胞如化細胞,此類細胞有比較強的細胞膜可以禁得起各種人為操作,而許多具有研究價值的細胞(例如元代培養(yǎng)的神經元)胞膜較弱容易破裂,且胞體表面不規(guī)整,現有的自動膜片鉗系統(tǒng)難以派上用場。因此,迫切需要一種新型的全自動膜片鉗電生理紀錄系統(tǒng)來解決以上問題。金華神經生物學腦定位膜片鉗原理及步驟膜片鉗實驗要從一大批的實驗數據中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論。
膜片鉗使用的注意事項:工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質分子對相應離子通透難易程度等特性的一種實驗技術。它的基本原理是以一個光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經或肌細胞的膜接觸,之后對微電極另一端開口處施加適當的負壓用電極的纖細開口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會形成緊密的封接,它的電阻能夠達到數個或數十個千兆歐,這世界上就是在化學上完全隔離了吸附在微電極開口處的那一片膜同膜的其余部分,通過微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關聯。膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。
膜片鉗技術及其應用:它是作者在\"膜片鉗技術及其應用\"領域所進行的研究工作的總結,同時也吸取了國際上的先進技術和新近的研究成果。內容包括:細胞電生理與膜片鉗技術,膜片鉗系統(tǒng)的組建及實驗技術概要,膜片鉗放大器原理與低噪聲設計,單通道和全細胞電流記錄技術,數據采集和分析,細胞分泌活動的膜電容監(jiān)測技術和安培測量技術,細胞內鈣離子濃度的測量及鈣庫特性,腦切片膜片鉗技術,心肌細胞的藥理特性和植物細胞的離子通道特性。全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:外灌流時間常數:~200ms;內灌流時間常數:~2s。
膜片鉗的技術原理:膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來,由于電極尖銳端與細胞膜的高阻封接,在電極尖銳端籠罩下的那片膜事實上與膜的其他部分從電學上隔離,因此,此片膜內開放所產生的電流流進玻璃吸管,用一個極為敏感的電流監(jiān)視器(膜片鉗放大器)測量此電流強度,就表示單一離子通道電流。膜片鉗技術的建立,對生物學科學特別是神經科學是一具有重大意義的變革。這是一種以記錄通過離子通道的離子電流來反映細胞膜單一的(或多個)的離子通道分子活動的技術。此技術的出現自然將細胞水平和分子水平的生理學研究聯系在一起,同時又將神經科學的不同分野必然地融匯在一起,改變了既往各個分野互不聯系、互不滲透,阻礙人們全部認識能力的弊端。用膜片鉗技術可以直接觀察和分辨單離子通道電流及其開閉時程。金華神經生物學腦定位膜片鉗原理及步驟
全自動膜片鉗系統(tǒng)技術指標:操作簡單,全過程可自動化。金華神經生物學腦定位膜片鉗原理及步驟
膜片鉗的應用:對藥物作用機制的研究:在通道電流記錄中,可分別于不同時間、不同部位(膜內或膜外)施加各種濃度的藥物,研究它們對通道功能的可能影響,了解那些選擇性作用于通道的藥物影響人和動物生理功能的分子機理。這是膜片鉗技術應用較普遍的領域,既有對西藥藥物機制的探討,也普遍用在重要藥理的研究上。如開麗等報道細胞貼附式膜片鉗單通道記錄法觀測到人參二醇組皂苷可抑制正常和“缺血”誘導的大鼠大腦皮層神經元L-型鈣通道的開放,從而減少鈣內流,對缺血細胞可能有保護作用。陳龍等報道采用細胞貼附式單通道記錄法發(fā)現烏頭堿對培養(yǎng)的Wistar大鼠心室肌細胞L-型鈣通道有阻滯作用。金華神經生物學腦定位膜片鉗原理及步驟
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