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來源: 發布時間:2023年02月01日

膜片鉗實驗系統:根據不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統,但有若干共同的基本部件,包括機械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設備架)、光學部分(顯微鏡、視頻監視器、單色光系統)、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數據采集的設備、計算機系統)和微操縱器在大多數膜片鉗實驗,要求所有實驗儀器及設備均具有良好的機械穩定性,以使微電極與細胞膜之間的相對運動盡可能小。防震工作臺放置倒置顯微鏡和與之固定連接的微操縱器,其他設備置于臺外。屏蔽罩由銅絲網制成,接地以防止周圍環境的雜散電場對膜片鉗放大器的探頭電路的干擾。儀器設備架要靠近工作臺,便于測量儀器與光學儀器配接。膜片鉗技術可用于研究特殊制備的巨型球狀體中的細菌離子通道。連云港全自動實用膜片鉗網站

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膜片鉗電生理紀錄系統及記錄方法:細胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當紀錄 電極接觸到細胞膜時電阻會開始上升,然后以人工方式對紀錄電極內施加一個負壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會加速上升,當紀錄電極的電阻達到千兆歐姆(Giga Ω)時,意味著細胞膜與電極之間幾乎沒有電流漏出,之后對電極內壓力施以一個快速的負壓將細胞膜吸破,這樣紀錄電極與細胞胞體之間會形成一個封閉的電容,此時就可以開始對細胞進行實驗。連云港全自動實用膜片鉗網站膜片鉗實驗要從一大批的實驗數據中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論。

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膜片鉗使用的基本方法是,把經過加熱拋光的玻璃微電極在液壓推進器的操縱下,與清潔處理過的細胞膜形成高阻抗封接,導致電極內膜片與電極外的膜在電學上和化學上隔離起來,由于電性能隔離與微電極的相對低電阻(1~5MΩ),只要對微電極施以電壓就能對膜片進行鉗制,從微電極引出的微小離子電流通過高分辨、低噪聲、高保真的電流-電壓轉換放大器輸送至電子計算機進行分析處理。膜片鉗技術實現的關鍵是建立高阻抗封接,并能通過特定的記錄儀器反映這些變化,因而,膜片鉗實驗室除了一般電生理實驗所需的儀器外,還特需防震工作臺、屏蔽罩、膜片鉗放大器、三維液壓操縱器、倒置顯微鏡、數據采集卡、數據記錄和分析系統等。

膜片鉗技術操作方法:實驗前準備:打開總電源及穩壓電源,打開電腦、放大器,并開啟程序軟件,新建數據文檔并準備開始試驗;用P97微電極拉制儀拉制玻璃電極若干備用;檢查減震臺的減震效果,打開倒置顯微鏡,監視器和微操備用,取-血細胞將其中玻片取出放入小培美血中,置于倒置顯微鏡下,于低倍鏡下尋找狀態良好的細胞,并轉入高倍鏡下再次確認細胞狀態及貼壁情況等,確認細胞后,取電極一根充灌電極內液,彈出氣泡,然后套入銀絲并插入探頭中扭緊旋鈕,用注射器管道給電極一點點正壓,將電極入水,入水后,查案入水電阻,要在4-8M左右的電極才可以使用,通過調節微操,使電極不斷向下接近細胞,待電極尖銳端逐漸變清晰并且將要接近細胞時停止向下,然后把電極移到細胞上方調節放大器上的調零旋鈕以保證基線在零水平。膜片鉗技術的應用范圍:在心血管藥理方面的研究。

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全自動膜片鉗的優勢:自動化:抓取細胞、形成封接、破膜等整個實驗操作全部自動化,極大的節約實驗人員的時間精力。簡約化:傳統膜片鉗所需要的顯微鏡、顯微操作系統、微電極拉制儀,防震臺、屏蔽網等全都不需要。效率高:是傳統膜片鉗實驗效率的5-10倍。可靠性:實驗結果輕松復制。經濟實惠:藥物消耗低,每次實驗記錄較低只需5μl內外液體。零技術門檻:無需膜片鉗操作經驗,輕松上手。高芯片封接:封接電阻可達1GΩ。確保實驗可靠性。兼容性強:可與市場上大多數放大器兼容。應用范圍廣:除擁有傳統膜片鉗功能外,還可以對手動膜片鉗無法涉及的亞細胞結構進行記錄。擴展功能多:配套擴展設備豐富,如內灌流系統、溫度控制系統、脂質體制備器等。膜片鉗使用操作流程及注意事項:凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求。連云港全自動實用膜片鉗網站

膜片鉗技術的應用范圍:在神經科學中的研究。連云港全自動實用膜片鉗網站

全細胞膜片鉗模式下有電壓鉗記錄和電流鉗記錄兩種。電壓鉗記錄的原理與電壓鉗技術相似,但有所不同:首先,全細胞電壓鉗記錄只使用單根電極,但在電學效果上同時實現了電壓鉗制和電流記錄。其次,電壓鉗記錄的電極不細胞,對細胞造成的損傷較小,因而能用于小細胞如神經元的研究。電流鉗記錄則是通過鉗制電極電流來測量膜電位。電流鉗在本質上也是電壓鉗位,它將差分放大器的輸出電流與指令電流相比較,然后將這個差動輸出施加到放大器前級的倒相端,通過高速反饋使得同相端的電壓與其相等,無論電極電流是否為零,都能從輸出電壓得到膜電位的準確數值。連云港全自動實用膜片鉗網站

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