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莆田血液PCR檢測技術原理及步驟

來源: 發布時間:2022年07月19日

聚合酶鏈式反應是一種在體外快速擴增特定基因或DNA序列的方法,故又稱為基因的體外擴增法。PCR技術類似于DNA的天然復制過程,其特異性依賴于與靶序列兩端互補的寡核苷酸引物。PCR能快速特異擴增任何已知目的基因或DN段,并能輕易在皮克(pg)水平起始DNA混合物中的目的基因擴增達到納克、微克、毫克級的特異性DN段。因此,PCR技術一經問世就被迅速而較廣地用于分子生物學的各個領域。 異常結果: 各種疾病所致的異常,例如梅毒。一期梅毒。即硬下疳 ,潛伏期2-4周,外生殖器部位發生暗紅色硬腫塊 、淺潰瘍 ,有軟骨樣硬度,周圍淋巴結腫大。二期梅毒。在一期梅毒 1-2 個月之后,全身皮膚、粘膜發生對稱泛發皮疹、斑疹、、疹等。粘膜可發生粘膜斑、扁平濕疣,傳染性強。三期梅毒。發生在染上后2-3年乃至10年,皮膚為樹膠樣腫,還可涉及骨、關節、心、血管,表現為主動脈炎、主動脈瓣閉鎖不全和主動脈瘤等,侵及神經為脊髓癆 ,全身麻痹 ( 麻痹性癡呆 )等等。 需要檢查的人群:疑似某種特定的疾病病人,進行分子特異性檢查。在嵌套聚合酶鏈反應中,除了預期的靶之外,該產物可能仍然由非特異性擴增的DN段組成。莆田血液PCR檢測技術原理及步驟

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PCR的反應條件:dNTP濃度過高會加快反應速度,但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增,低則合成產物量減少。TaqDNA聚合酶無校正功能,摻入錯誤率達2*E-4個核苷酸,一個30個循環的擴增反應0.1%-0.25%總錯誤率。在90~95度下可使整個基因組的DNA變性為單鏈。一般94~95度30~60s。時間過長使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破壞增多。DNA很快冷卻到40~60度使引物和模板結合。引物長度在15~25時退火溫度。莆田血液PCR檢測技術原理及步驟聚合酶鏈反應非常敏感,有可能產生數百萬到數十億份特定產品的拷貝,用于測序、克隆和分析。

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聚合酶鏈反應也可以用作以下敏感試驗的一部分組織分型,對移植至關重要。截至2008年,甚至有人提議用聚合酶鏈反應檢測取代傳統的血型抗體檢測。許多形式的病癥涉及致病基因的改變。通過使用基于聚合酶鏈反應的測試來研究這些突變,醫治方案有時可以根據患者的不同而不同。聚合酶鏈反應可以早期診斷惡性疾病,如白血病和淋巴瘤,這是目前病癥研究中發展很快的,并且已經被常規使用。PCR檢測可以直接在基因組DNA樣品上進行,以檢測易位特異性惡性細胞,其靈敏度至少是其他方法的10,000倍。聚合酶鏈反應在醫學領域非常有用,因為它允許分離和擴增病癥抑制劑。例如,定量PCR可以用于量化和分析單細胞,以及識別DNA、mRNA和蛋白質的確認和組合。

聚合酶鏈式反應:1976年,中國科學家,發現了穩定的Taq DNA聚合酶,為PCR技術發展也做出了基礎性貢獻。PCR是利用DNA在體外攝氏95°高溫時變性會變成單鏈,低溫(經常是60°C左右)時引物與單鏈按堿基互補配對的原則結合,標本核酸模板在提取過程中,由于吸樣污染導致標本間污染;有些微生物標本尤其是病毒可隨氣溶膠或形成氣溶膠而擴散再調溫度至DNA聚合酶很適反應溫度(72°C左右),DNA聚合酶沿著磷酸到五碳糖(5'-3')的方向合成互補鏈。基于聚合酶制造的PCR儀實際就是一個溫控設備,能在變性溫度,復性溫度,延伸溫度之間很好地進行控制。聚合酶鏈式反應可看作是生物體外的特殊DNA復制。

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聚合酶鏈反應:熱啟動聚合酶鏈式反應:一種在PCR的初始建立階段減少非特異性擴增的技術。它可以通過將反應組分加熱到變性溫度(例如95 c)在加入聚合酶。[36]已經開發了特殊的酶系統,通過結合抗體來抑制聚合酶在環境溫度下的活性[37][37]或者通過共價鍵結合的抑制劑的存在,該抑制劑在高溫活化步驟后解離。熱啟動/冷完成聚合酶鏈反應是通過新的雜合聚合酶實現的,這些酶在環境溫度下不活躍,在伸長溫度下立即。序列間特異性聚合酶鏈反應(ISSR):一種用于DNA指紋識別的聚合酶鏈反應方法,它放大簡單重復序列之間的區域,以產生擴增片段長度的獨特指紋。電子聚合酶鏈反應(數字聚合酶鏈反應、虛擬聚合酶鏈反應、電子聚合酶鏈反應、電子聚合酶鏈反應)是指計算工具使用給定的一組引物 ( 探針)來擴增來自測序的基因組或轉錄組的DNA 序列,用于計算理論聚合酶鏈反應結果。電子PCR被提出作為分子生物學的教育工具。聚合酶鏈反應具有定量合成產物的優點。莆田血液PCR檢測技術原理及步驟

PCR反應的關鍵環節有模板核酸的制備,引物的質量與特異性,酶的質量及溴乙錠的使用。莆田血液PCR檢測技術原理及步驟

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