當你應用像肽圖這樣的方法時，你可以從Genovis中級方法中獲得的信息量就沒有那么多了。一個主要的區(qū)別是你不能像在肽水平上那樣將修改定位到單個氨基酸。然而，中級分析比肽圖譜具有快速和簡單的巨大優(yōu)勢，因為需要分析的色譜峰要少得多，數(shù)據(jù)處理任務要簡單得多。此外，在中級實驗中，手工實驗步驟要少得多，F(xiàn)abALACTICA（IdeS）酶切消化方法不需要針對不同的人體IgG1進行優(yōu)化。一旦在氨基酸水平上進行了PTM表征，我們非常認為中級表征肽圖的一種補充方法，可以在更常規(guī)的基礎上應用。中級分析更適用于高通量或監(jiān)測類型的方法，并可用于支持肽圖分析。IgMBRAZOR酶能夠?qū)碗s和高分子量的人 IgM 進行中級分析，從而促進疫苗診斷等過程中的IgM表征和質(zhì)量控制。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

如果您想分析單克隆抗體或單克隆抗體分子，現(xiàn)在有了Genovis的一些新產(chǎn)品（IgA酶，IgM酶），其他的模式和分子形式（IdeS高通量的產(chǎn)品形式）來測定和監(jiān)測許多不同的CQA，Genovis可以緩解使用不同分析方法時可能出現(xiàn)的瓶頸。 生產(chǎn)大量的樣品當然很好，但如果分析團隊不能足夠快地處理它們，那就沒有什么意義了。 高通量分析需要一致的、易于使用的方法，當然這些方法要快速，而且可能易于自動化。 這正是我們所能提供的，這使Genovis能夠支持更多不同功能的客戶。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶通過將酶偶聯(lián)到樹脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進一步加速反應，以獲得更完整的蛋白質(zhì)的消化。

Genovis是一家瑞典生物技術公司，自2010年起，為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具，主要用于生物制藥行業(yè)和學術界。我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?，用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應用信息，如果您有興趣，可以和我們一起做一個“SmartStories”，也可以聯(lián)系我們。

樣品制備的條件可能會在樣品中誘發(fā)偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進行質(zhì)譜分析。如果可能的話，避免多個步驟并在一鍋反應中進行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對離液劑和去液劑的穩(wěn)定性和耐受性，在一系列試劑中測試了酶活性，并使用底物測定進行了評估。數(shù)據(jù)顯示，GingisREX在6M時耐受尿素，吐溫高達1%，但活性在0.1%時受到SDC的負面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應，以同時消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個 scFv 融合，形成一個雙特異性分子，其中一個 scFv 靶向細胞毒性 T 細胞，另一個靶向Ai癥抗原。該蛋白質(zhì)由四個蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，兩個 scFv 均由 VL 和 VH 區(qū)域組成，總共由三個柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質(zhì)的大尺寸（54 kDa）可能對通過完整質(zhì)譜法進行產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測構(gòu)成挑戰(zhàn)，因為標準MS儀器可能無法提供蛋白質(zhì)的單同位素分辨率。含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進行詳細表征的中級方法。

與IdeS不同，度拉糖肽由兩個胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時。為了降低樣品復雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明，使用GlySERIAS進行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時在多個位點進行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對量中顯示出可重復的結(jié)果。可消化柔性富含甘氨酸的融合蛋白連接子，例如 Gly4Ser 和 GlyxSery （GS） 以及聚甘氨酸 （G） 接頭。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，不被 FabRICATOR Z 消化。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

與IdeS不同，為了獲得更均勻的度拉糖肽融合蛋白的消化產(chǎn)物，用Genovis的GlySERIAS固定化蛋白質(zhì)消化該蛋白質(zhì)，該蛋白由與瓊脂糖珠共價偶聯(lián)的GlySERIAS酶組成。通過將酶偶聯(lián)到樹脂上，可以增加酶與蛋白質(zhì)的比率，從而可以進一步加速反應，以獲得更完整的連接子消化。此外，該酶不會存在于樣品制備中，可能會干擾樣品分析。為了進行比較，度拉糖肽在37°C下用GlySERIAS固定化過夜，或用GlySERIAS凍干1小時并在37°C下過夜消化。 為了降低樣品復雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR凍干去除Fc聚糖，并減少鏈間二硫鍵。通過反相LC-MS對樣品的分析表明，GlySERIAS Immobilized幾乎完全消化了Fc結(jié)構(gòu)域中的連接子，留下了接近均質(zhì)的Fc/2產(chǎn)物，其中含有來自連接子的一個絲氨酸殘基。用 GlySERIAS 凍干 1 小時或過夜消化，兩者都會產(chǎn)生幾種 Fc 產(chǎn)物，并附著不同數(shù)量的絲氨酸和甘氨酸殘基。GLP-1肽在所有三個樣品中以兩種變體存在。使用GlySERIAS固定化消化的均質(zhì)Fc/2能夠詳細研究特定于Fc區(qū)域的質(zhì)量屬性。此外，在樣品中未觀察到干擾分析的酶峰。作為補充，F(xiàn)c/2 產(chǎn)物在用 GlySERIAS 凍干消化后殘留部分連接子，有助于研究位于 GS 連接子的修飾。黑龍江IgGZEROIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶