Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發的目的，并隨時準備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內二硫鍵，如果片段想用于結合研究，這一點尤為重要，因為結合效率和免疫反應性將被保留。FabRICATOR（IdeS）不需要還原條件來獲得比較好的活性。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體，Genovis的FabRICATORMagIC的設計具有靈活性，適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統上優化了FabRICATORMagIC的工作流程，但它可以轉移到其他自動化平臺，如果沒有自動化，在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后，將含有處理樣品的深孔板直接轉移到LC-MS的自動進樣器中進行快速色譜分析，或轉移到其他分析方法進行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容，以極大限度地減少自動化系統中可能發生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時，樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中，然后將板放入儀器中。設計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協議將控制每個步驟的孵育溫度和時間。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學也不需要任何額外的輔助因子，它將在不同生理緩沖中發揮作用。

為什么客戶想在他們的工作試用Genovis的FabRICATOR（IdeS）。FabRICATOR的高特異性(在鉸鏈下方有單個消化位點)以及它對IgG種和亞類表現出活性的事實使其成為高效表征一系列不同分子的理想工具。FabRICATOR的另一大優勢是速度。在大多數IgG上，您可以在短短30分鐘內生成F(ab’)2和Fc/2片段，這一速度簡化了方法開發，并允許快速有效的中層表征，使客戶能夠在不比做完整質量實驗長太多的時間內獲得更多關于分子的信息。Genovis發現更多的緩沖液與溶液中的FabRICATOR消解相容（更多信息）。Genovis已經測試了PBS和150mM醋酸銨，pH7，結果良好。并且應該也適用于FabRICATORHPLC。然而，緩沖液的離子強度會影響抗體片段在FabRICATORHPLC（IdeS）色譜柱上的保留，并且IgG1亞基需要至少100-150mM鹽才能洗脫為單個窄峰。其他IgG亞類或融合蛋白可能需要對緩沖液組成進行一些優化。

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并在兩小時內生成均質的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區下方的單個位點進行消化）。生成的片段可用于結晶和高階結構（HOS）的NMR研究、結合研究等。突變的鉸鏈區域是zhiliao性候選抗體的常見修飾，以降低效應器功能。這些突變可能會影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對含有常見LALA突變的抗體產生負面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基，能夠對具有突變鉸鏈區域的抗體進行流行的中級LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下鉸鏈區域具有LALA突變，并通過反相LC-MS進行分析。消化產生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段，用于中級LC-MS分析，發現產生了均相的Fc/2、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩健性能。Genovis發現大部分緩沖液與FabRICATOR活性兼容，已經測試了PBS和150mM 醋酸銨 pH7，也適用于FabRICATOR HPLC。

不同于IdeS，Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶，可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1，在兩小時內產生完整的 Fab 和 Fc 片段，無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區域的抗體（如 LALA 突變）具有活性，并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關鍵質量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 （...KSCDK / THTCPPCP...），生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結構的結果，使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖，則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。FabDELLO在天然條件下具有活性，需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細菌克隆而來的，并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽，分子量為 32 kDa。Genovis的FabRICATOR（IdeS） MagIC 以較少的用戶交互減少實驗和操作時間。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

高特異性也意味著相同的消化方案可以作為平臺方法應用于許多不同的抗體。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學

在Genovis，我們的策略是幫助客戶進行中級（或亞基）分析，這是我們的工作，特別是我們的蛋白質酶切產品。完整質量和肽圖譜是蛋白質表征的常用方法，我們發現，與簡單但信息有限的完整質量和高度復雜但信息豐富的肽圖譜相比，中級方法具有優勢。通過執行中級描述，您可以生成從完整的質量實驗中獲得的所有信息，具有額外的優勢。在對抗體進行完整質量分析時，很難明確地識別某些修飾。質譜儀器正在改進，可以更有效地分析更大的分子，但通過使用我們的SmartEnzymes，如IdeS，可以將抗體分解成更小的片段，這提高了這些實驗可以執行的分辨率，因此，增加了鑒定修飾的信心。此外，你不僅能夠更好地識別修改，而且你能夠將它們定位到蛋白質上的單個結構域，這是你在完整水平上無法做到的。遼寧GlycINATORIdeS蛋白酶蛋白組學