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安徽GlySERIASIdeS蛋白酶

來源: 發布時間:2024年11月21日

蛋白酶用于生成肽,用于質譜分析蛋白質。這些應用包括蛋白質組學和生物制藥的深度表征。由于遺漏了切割和樣品制備誘導的偽影,傳統的蛋白酶并不總是理想的,因此需要具有不同特異性的蛋白酶工具箱。Genovis的GingisREX 是一種精氨酸特異性蛋白酶,可將蛋白質 C 末端消化為精氨酸殘基。與胰蛋白酶肽相比,所得肽更長,并可能導致序列覆蓋率增加。質譜分析中蛋白酶的特異性對于獲得高質量的數據集和避免復雜的數據解釋至關重要。作為模型底物,使用胰島素氧化β鏈來比較 GingisREX 和 ArgC 的酶特異性。胰島素氧化β鏈含有一個精氨酸和一個賴氨酸殘基。在RP-HPLC和質譜法上分析GingisREX和ArgC的酶切肽。GingisREX在賴氨酸殘基上沒有酶活性或其他額外活性,即使在長時間孵育過夜后,酶與底物的比例也很高(1:5)。然而,ArgC在精氨酸殘基上顯示出主要活性,但在賴氨酸殘基上也可以看到酶消化。在酶與底物的比例為 1:20 和過夜孵育下,證明了 ArgC 的額外非特異性活性。在相同條件下,GingisREX未檢測到這種情況。數據證實了GingisREX精氨酸殘基的特異性活性,并顯示使用Arg-C在賴氨酸和其他殘基處的非特異性消化。小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,不被 FabRICATOR Z 消化。安徽GlySERIASIdeS蛋白酶

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經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。吉林FabALACTICAIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶發現GingisREX精氨酸殘基的特異性,Arg-C在賴氨酸和其他殘基的非特異性。

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與IdeS不同,Genovis的IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性蛋白酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生均質的F(ab')2和Fc片段。該酶能夠對復雜和高分子量的人IgM進行中級分析,從而促進疫苗、zhiliao和診斷等過程中的IgM表征。獨特-可實現IgM的中級表征和質量控制;快速–在30分鐘內生成均勻的F(ab')2和Fc片段;高度特異性–人IgM重鏈中的一個消化位點。IgMBRAZOR是一種獨特的IgM特異性酶,可在重鏈中CH2結構域下方的一個特定位點消化人IgM,產生F(ab')2和Fc片段。消化在30分鐘內完成,并且由于酶的特異性,如果孵育時間延長,則不存在過度消化的風險。該酶在pH值為5.5至9.0時具有活性,不需要還原條件或輔助因子即可發揮活性。良好的活性是在37°C下,但也可以在室溫下使用增加孵育時間進行消化。IgMBRAZOR在大腸桿菌中表達。該酶含有His標簽,分子量為38kDa。

與IdeS不同,Genovis的IgASAP是IgA消化酶家族。IgASAPSub1是一種IgA1特異性酶,可在鉸鏈上方的一個特定位點消化人IgA1,而IgASAPSub1+2特異性消化鉸鏈上方的IgA1和IgA2m1。兩種酶都產生完整且均質的Fab和Fc片段。IgASAP酶能夠生成完整的單價Fab片段以及IgA的中級分析,從而促進IgA的表征,例如,在疫苗、zhiliao和診斷的開發過程中。獨特的酶促工具,可實現IgA的中級表征和質量控制;生成均相的Fab和Fc片段,并保留免疫反應性;高度特異性–人IgA鉸鏈上方的一個消化位點。IdeS蛋白酶普遍適用于常見類型抗體,由于分析的簡單性,中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。

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與IdeS不同,度拉糖肽由兩個胰高xue糖素樣肽-1 (GLP-1) 分子組成,它們通過柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區域。為了分別研究肽和 Fc 區域,從而鑒定結構域特異性 PTM,用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時。為了降低樣品復雜性,使用內切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖,并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對樣品的分析表明,使用GlySERIAS進行連接子消化后,肽從Fc區域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點,這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測為幾種變體,其中不同數量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外,還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時在多個位點進行消化,但一式三份的酶解在獲得的不同Fc/2變體的相對量中顯示出可重復的結果。Genovis提供的IgASAP Sub1+2 在鉸鏈上方的一個特定位點消化人 IgA1 和 IgA2m1,產生完整且均勻的 Fab 和 Fc 片段。安徽GlySERIASIdeS蛋白酶

這正是您使用FabRICATOR(IdeS蛋白酶)可以得到的。安徽GlySERIASIdeS蛋白酶

與IdeS不同,Romiplostim 由四個相同的血小板生成素 (TPO) 受體結合肽和一個 Fc 片段組成,通過柔性聚甘氨酸序列連接在一起。與度拉糖肽類似,用 Genovis的GlySERIAS Immobilized 在 37°C 下過夜,或用 GlySERIAS 凍干 1 小時并在 37°C 下過夜消化該蛋白質。 鏈間二硫鍵被還原,以便于通過反相LC-MS進行以下分析。與度拉糖肽的觀察結果類似,用固定化酶消化產生均質的 Fc/2,剩下一個連接子殘基,此處為甘氨酸殘基。這有助于識別專門位于Fc區域的修改。用凍干酶消化 1 小時得到 Fc/2,剩余 4 個甘氨酸殘基和少量的 Fc/2 仍與一個 TPO 肽連接。另一方面,這使得研究 Fc/2 和第yi個肽之間的連接區域成為可能,而不會受到第二個肽的干擾。用 GlySERIAS 凍干液過夜消化產生 2 個 Fc/2 變體,分別剩下 4 個和 1 個甘氨酸殘基。根據消化時間的不同,使用凍干產物釋放的肽以五或七種變體存在,接頭中殘留的甘氨酸殘基數量不同,而使用固定化產物釋放的肽以四種變體存在。安徽GlySERIASIdeS蛋白酶

標簽: 中鹽核酸酶
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