一些應用(如結合研究)具有高度靈敏度,因此在制備中需要不含殘留酶的純抗體片段。因此,Genovis的 IgG 特異性蛋白酶也以固定化酶提供,可快速輕松地生成均質 F(ab')2 和 Fc/2 片段。FabRICATOR Immobilized 含有固定化的 FabRICATOR (IdeS),用于制備來自多種 IgG 的 F(ab')2 和 Fc 片段(對于兔 IgG,請咨詢),而小鼠 IgG2a 和 IgG3 可以使用含有 FabRICATOR Z Immobilized 的 FabRICATOR Z Fab2 試劑盒進行處理 。 為了生成和純化完整的 F(ab')2 和 Fc/2 片段,使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒處理曲妥珠單抗,并通過 SDS-page 進行分析。首先,在室溫下在FabRICATOR固定化離心柱上消化抗體15分鐘,然后進行短離心步驟。在 CaptureSelect ? 離心柱上純化 F(ab')2 片段,并通過降低 pH 值,然后立即調整回中性 pH 值,一步洗脫結合的 Fc 片段。使用 FabRICATOR Fab2 試劑盒從酶切到收集片段的過程大約需要 1 小時GingisKHAN Fab Kit進行人IgG1(如曲妥珠單抗)的消化和抗體片段的后續純化。云南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切
經過多年的經驗積累及市場積淀,倍篤生物已組合多條不同產品線,分別滿足體外診斷、organoid及干細胞、細胞基因藥物等領域的需求。其中,細胞基因藥物領域產品線包含SAN HQ高鹽核酸酶及M-SAN HQ中鹽核酸酶、泊洛沙姆P 188 Bio、GMP級MSC/PSC培養基、GMP級膠原酶、AAV滴度檢測產品、工藝雜質及外源污染物殘留檢測產品、聚糖分析用酶、ADC偶聯技術、QED抗體對、AAV中和抗體、蛋白酶等;相關品牌有挪威ArcticZymes Technologies、德國BASF、德國Sartorius、德國Nordmark、瑞典Genovis、美國QED、中國君研生物等。云南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切用Genovis的GlySERIAS 消化,所有三個連接子區域均被消解。
其他基于 IgG 的生物制藥需要仔細表征和監測關鍵質量屬性,例如氧化、糖基化和其他翻譯后修飾。與抗體的克隆選擇、工藝開發和穩定性研究相關的大量樣品通常通過液相色譜質譜 (LC-MS) 進行分析。然而,在LC-MS之前進行足夠規模的樣品制備通常具有挑戰性。為了解決樣品制備的挑戰,Genovis將半胱氨酸蛋白酶FabRICATOR(IdeS)固定在磁性瓊脂糖珠上,現在稱為FabRICATOR MagIC。FabRICATOR固定在磁珠上,可同時快速自動消化多種抗體,促進中級表征工作流程。Genovis的FabRICATOR MagIC 如何以較少的用戶交互減少實驗和操作時間,降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。
與肽圖譜相比,根據Genovis科學家的經驗,尤其是對于像抗體這樣的分子,許多人在常規實驗中做了太多的肽圖譜,而中級水平(Middle-level)的方法可以很好地工作。中級方法(IdeS酶切抗體)需要更少的實際操作步驟和較少的示例處理,所有這些都意味著過程中出錯的事情更少。我們的許多酶可以作為平臺方法,同樣的方法適用于絕大多數的抗體,這不是肽圖的情況下,可能需要優化整個樣品制備,LC分離,質譜設置和數據分析的每個不同的抗體分析。這些變化可能是很小的,但沒有一種適用于所有肽圖的方法。由于分析和數據分析的簡單性,中級方法非常適合自動化和高通量的工作流程。肽圖當然可以自動用于樣品制備,但高通量肽圖生成大量數據,仍然需要徹底分析。事實上,肽圖譜是一個多步驟的過程,每一個步驟都可能破壞方法,并可能導致破壞蛋白質的人工制品,很難交叉訓練給非專業人員。中級水平的方法很容易交叉訓練,我們的方法在質量控制實驗室中被成功地使用。肽圖譜是一種用于修飾分析和氨基酸確認的方法,但一旦完成了這一工作,我相信使用中級分析可以成功地更有效地完成抗體樣本的大部分工作。也不需要任何額外的輔助因子,它將在不同生理緩沖中發揮作用。
Genovis除了提供IdeS酶以外,還提供很多種特異性蛋白酶,如半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA (IgdE)。IgdE 在鉸鏈正上方的一個特定位點消化人 IgG1,產生完整的 Fab 和 Fc 片段的均質池。它在pH值和鹽濃度范圍內具有活性,不需要任何還原劑或輔助因子。因此,與許多其他常用的蛋白酶相比,FabALACTICA不需要任何優化來避免過度消化。這使得FabALACTICA成為一種有吸引力的酶,例如在還原和非還原條件下的LC-MS分析、抗體高階結構(HOS)的結晶和NMR研究、雙特異性或多特異性抗體的表征、單價結合研究和完整的Fc聚糖分析。這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱,用于亞基的親和純化。云南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切
來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成。云南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切
Genovis提供具有低水平內Du素的FabRICATOR(IdeS)凍干酶,用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR(IdeS)是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶,可消化鉸鏈下方單個氨基酸位點的抗體,產生均質的F(ab')2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以凍干粉的形式提供兩種不同規格:2000和5000單位,分別用于消化2mg或5mgIgG。該產品配方每瓶的內Du素含量較低,2000單位小瓶的內Du素含量為<0.04EU/瓶,5000單位小瓶的內Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化,內DU素水平低;適用于靈敏的體內或基于細胞的檢測。云南IgGZEROIdeS蛋白酶抗體酶切