樣品制備的條件可能會(huì)在樣品中誘發(fā)偽影，因此需要避免高溫和堿性pH值進(jìn)行質(zhì)譜分析。如果可能的話(huà)，避免多個(gè)步驟并在一鍋反應(yīng)中進(jìn)行消化和還原也可能是有益的。與IdeS不同，為了探索Genovis的GingisREX對(duì)離液劑和去液劑的穩(wěn)定性和耐受性，在一系列試劑中測(cè)試了酶活性，并使用底物測(cè)定進(jìn)行了評(píng)估。數(shù)據(jù)顯示，GingisREX在6M時(shí)耐受尿素，吐溫高達(dá)1%，但活性在0.1%時(shí)受到SDC的負(fù)面影響。該酶在 pH 值范圍為 5.0 至 9.0 時(shí)顯示出活性，在 pH 值為 6.5-8.0 之間。綜上所述，GingisREX可用于一鍋反應(yīng)，以同時(shí)消化和變性6M尿素。與Genovis的IdeS不同，雙特異性 T 細(xì)胞接合器 （BiTE） 分子是一種融合蛋白療法，其中兩個(gè) scFv 融合，形成一個(gè)雙特異性分子，其中一個(gè) scFv 靶向細(xì)胞毒性 T 細(xì)胞，另一個(gè)靶向Ai癥抗原。該蛋白質(zhì)由四個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成，兩個(gè) scFv 均由 VL 和 VH 區(qū)域組成，總共由三個(gè)柔性 GS 連接子連接。這種蛋白質(zhì)的大尺寸（54 kDa）可能對(duì)通過(guò)完整質(zhì)譜法進(jìn)行產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)構(gòu)成挑戰(zhàn)，因?yàn)闃?biāo)準(zhǔn)MS儀器可能無(wú)法提供蛋白質(zhì)的單同位素分辨率。IgA2 亞類(lèi)以三種等位基因形式存在，A2m1、A2m2 和 A2m3。山東IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis酶的適應(yīng)性和更高的通量和自動(dòng)化工作流程的中級(jí)方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進(jìn)，在表征實(shí)驗(yàn)室中有更大的能力進(jìn)行更多類(lèi)型的分析，或者在工藝開(kāi)發(fā)或QC實(shí)驗(yàn)室中有更先進(jìn)的分析儀器。 當(dāng)涉及到能夠支持大量樣本分析的活動(dòng)時(shí)，例如克隆篩選，工藝開(kāi)發(fā)和驗(yàn)證以及穩(wěn)定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產(chǎn)品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應(yīng)用于這些類(lèi)型的工作，而且，也適用于受控環(huán)境中的批次放行方法。Genovis的產(chǎn)品很好地支持這種類(lèi)型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產(chǎn)品和現(xiàn)有產(chǎn)品的不同形式，以支持客戶(hù)的工作。山東IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，使用Genovis的GlySERIAS進(jìn)行度拉糖肽的連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。

Genovis提供具有低水平內(nèi)Du素的FabRICATOR（IdeS）凍干酶，用于IgG的鉸鏈以下消化。FabRICATOR（IdeS）是一種IgG特異性半胱氨酸蛋白酶，可消化鉸鏈下方單個(gè)氨基酸位點(diǎn)的抗體，產(chǎn)生均質(zhì)的F（ab'）2和Fc片段。FabRICATORLowEndotoxin以?xún)龈煞鄣男问教峁﹥煞N不同規(guī)格：2000和5000單位，分別用于消化2mg或5mgIgG。該產(chǎn)品配方每瓶的內(nèi)Du素含量較低，2000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.04EU/瓶，5000單位小瓶的內(nèi)Du素含量為<0.10EU/瓶。有效消化，內(nèi)DU素水平低；適用于靈敏的體內(nèi)或基于細(xì)胞的檢測(cè)。

與IdeS不同，度拉糖肽由兩個(gè)胰高xue糖素樣肽-1 （GLP-1） 分子組成，它們通過(guò)柔性 GS 接頭連接到人 IgG4 的 Fc 區(qū)域。為了分別研究肽和 Fc 區(qū)域，從而鑒定結(jié)構(gòu)域特異性 PTM，用 Genovis的GlySERIAS 在 37°C 下凍干消化度拉糖肽 1 小時(shí)。為了降低樣品復(fù)雜性，使用內(nèi)切糖苷酶GlycINATOR Lyophilized去除Fc聚糖，并用DTT還原鏈間二硫鍵。反相LC-MS對(duì)樣品的分析表明，使用GlySERIAS進(jìn)行連接子消化后，肽從Fc區(qū)域完全去除。連接子中的大量甘氨酸殘基為GlySERIAS提供了許多不同的潛在消化位點(diǎn)，這就是為什么Fc/2和GLP-1肽都被檢測(cè)為幾種變體，其中不同數(shù)量的甘氨酸和絲氨酸殘基仍然連接。此外，還鑒定了GLP-1肽的氧化。盡管GlySERIAS同時(shí)在多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行消化，但一式三份的酶解在獲得的不同F(xiàn)c/2變體的相對(duì)量中顯示出可重復(fù)的結(jié)果。GlySERIAS是從噬菌體K克隆而來(lái)的，在大腸桿菌中表達(dá)。該酶含有 His 標(biāo)簽，分子量為 18 kDa。

與IdeS不同，融合蛋白是通過(guò)將兩種或多種蛋白質(zhì)或肽的功能組合成一個(gè)量身定制的分子來(lái)創(chuàng)造的，以專(zhuān)門(mén)應(yīng)對(duì)挑戰(zhàn)。連接此類(lèi)蛋白質(zhì)或肽結(jié)構(gòu)域的常見(jiàn)方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸殘基（G），或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基（GS）以形成重復(fù)序列。這為連接子提供了足夠的靈活性，不會(huì)干擾連接蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)域的功能。然而，這些新模式帶來(lái)了新的分析挑戰(zhàn)，需要新的工具來(lái)促進(jìn)表征和產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)測(cè)。中級(jí)分析已成為分析單克隆抗體療法的標(biāo)準(zhǔn)方法，涉及將分子消化成幾個(gè)定義的亞基。它們足夠小，可以獲得高質(zhì)量的質(zhì)譜圖，并為產(chǎn)品質(zhì)量屬性提供特定領(lǐng)域的信息。由于G和GS連接子對(duì)常見(jiàn)蛋白酶的降解具有抗性，因此很難分離結(jié)構(gòu)域以進(jìn)行深入分析。因此，Genovis開(kāi)發(fā)了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域，并實(shí)現(xiàn)對(duì)融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進(jìn)行詳細(xì)表征的中級(jí)方法。Genovis的內(nèi)切糖苷酶 IgGZERO和 GlycINATOR 還可以研究完整的 ADC，但降低復(fù)雜性并提高分辨率。安徽GingisREXIdeS蛋白酶IgG特異性蛋白酶

Genovis的FabRICATOR （IdeS蛋白酶）在30分鐘內(nèi)消化IgG，如果孵育時(shí)間延長(zhǎng)，則不存在過(guò)度消化的風(fēng)險(xiǎn)。山東IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)

Genovis的FabRICATOR（IdeS）酶 可用于 IgG 的所有人類(lèi)亞類(lèi)以及人源化和嵌合 IgG。該酶對(duì)其他物種的 IgG 也有活性，包括來(lái)自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類(lèi)別的 IgG。因此，F(xiàn)abRICATOR的高特異性在某些情況下會(huì)使其對(duì)鉸鏈區(qū)域的突變敏感，并損害酶活性。來(lái)自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成，與 FabRICATOR 相比，F(xiàn)abRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而，小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列，并且不被 FabRICATOR Z 消化。對(duì)于這種抗體種類(lèi)，F(xiàn)abULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。山東IdeS蛋白酶蛋白組學(xué)