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浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

來源: 發布時間:2024年07月16日

為了研究 OglyZOR 對天然糖蛋白的活性,將該酶與依那西普、TNFR 和阿巴西普在 37°C 下有或沒有 SialEXO 孵育 1 小時。當唾液酸被去除時,OglyZOR酶有效地水解了所有三種底物中的O-聚糖。Genovis的OglyZOR 酶可有效水解天然糖蛋白中的he心 1 二糖 (Gal-β1,3-GalNAc)。這使得這些酶適合在LC-MS分析之前制備樣品,以鑒定其他PTM或確認氨基酸序列O-糖基化生物制藥的全去糖基化:O-糖基化生物制藥(如依那西普)很難表征。為了能夠通過質譜法測定完整質量數,我們進行了酶促總去糖基化。N-聚糖被Genovis的PNGase F裂解,而O-聚糖可以與OglyZOR和SialEXO一起去除。。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

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Genvois的SialEXO產品是唾液酸酶,用于N-和O-糖基化蛋白的有效去唾液酸化。SialEXO凍干由兩種唾液酸酶組成,每種唾液酸酶都具有獨特的活性,并且它們同時起作用。一種酶對α2-3、α2-6和α2-8連接的唾液酸具有很好的活性,另一種酶(SialEXO 2-3)通過α2-3-鍵快速水解唾液酸。SialEXO凍干可在2小時內去除天然蛋白質上的所有唾液酸。SialEXO在天然條件下水解糖蛋白,在pH值范圍為6.5至9時顯示出活性。這些酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。兩種酶都含有 His 標簽,酶的分子量為 43 kDa 和 66 kDa。 浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發GlycOCATCH親和純化以方便的離心柱形式提供,包含4 個 GlycOCATCH。

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與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR用于攜帶N-和簡單O-糖的糖蛋白的去糖基化。 OmniGLYZOR 試劑盒包括:OmniGlyZOR 微離心柱;PNGase F 凍干;RapiGest?* SF表面活性劑。除非底物蛋白變性,否則某些 N-糖基化位點很難或無法被 PNGase F 接近。在OmniGLYZOR Microspin柱上孵育后剩余的N-糖可以在變性條件下使用試劑盒中包含的PNGase F凍干和RapiGest? SF表面活性劑通過額外的去糖基化步驟去除。使用Genovis的OpeRAT對EPO進行O-糖位點特異性消化:對于jin攜帶一個或幾個 O-糖基化位點的簡單底物蛋白,OpeRATOR 也可用于繪制中間水平的 O-糖基化位點。

Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結構分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖;2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心;3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。Genvois展示了使用兩種zhiliao蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能:依那西普和促紅xibao生成素 (EPO)。

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Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(O-糖苷酶),可特異性水解天然糖蛋白上的he心 1 O-聚糖。OglyZOR 用于去除 O-糖,用于糖分析、確認 O-糖的存在和降低樣品的異質性。Genovis的OglyZOR 是一種內切糖苷酶(內切-α-N-乙酰半乳糖氨酸酶),可催化來自天然糖蛋白的he心 1 和有限程度的he心 3 O-聚糖的水解。 OglyZOR酶活性需要去除唾液酸,因此,由唾液酸酶混合物組成的唾液酸凍干,用于去除α2-3,α2-6和α2-8連接的唾液酸,與OglyZOR一起提供。在pH 6.5至7.5和37°C下獲得良好活性。依那西普的磷性能測試?:PNGaseF去除N-聚糖。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

SialEXO和GalactEXO截斷O-聚糖后,應用GalNAcEXO酶去除剩余的GalNAc殘基。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶,可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端,包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的,該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基,也不會在糖蛋白的N-糖基化位點。該酶接受 O-聚糖結構,包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結構以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。浙江固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發

標簽: 中鹽核酸酶
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