G0F 抗體在 30 分鐘內:半乳糖的存在會影響zhiliao性抗體引發的效應功能,為了研究抗體的作用方式,可能需要徹底去除半乳糖殘留物。Genovis的GalactEXO Immobilized 的 β1-4 半乳糖苷酶活性在曲妥珠單抗上使用 30 分鐘孵育證明。genovis的GalactEXO Immobilized 由強大的 GalactEXO 酶組成,該酶固定在瓊脂糖珠上,并以易于使用的微離心柱形式格式化。GalactEXO是β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白上的半乳糖殘基。使用FabRICATOR?將抗體消化成亞基,并使用LC-MS進行分析。使用 GalactEXO 凍干和 GalactEXO 固定化都可以看到向 G0F 糖型的轉變,但后者在z終制劑中沒有留下酶。沒有任何半乳糖基化結構表明半乳糖殘基完全水解,因此LC-MS數據中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。沒有任何半乳糖基化結構表明半乳糖殘基完全水解,因此LC-MS數據中任何剩余的次要峰都可以注釋為亞基的糖化。與絲氨酸或蘇氨酸連接的 GalNAc(稱為 Tn 抗原)被 GalNAcEXO 快速有效地水解。青海固定化小柱形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis
該酶適用于在釋放的聚糖結構上修剪半乳糖,用于外切糖苷酶陣列,或用于生成具有均相 G0/G0F 聚糖譜的抗體。1. 高效β-半乳糖苷酶混合物 – 快速去除末端 β1-3 和 β1-4-連接的半乳糖;2. 有助于在亞基水平上識別糖基化修飾;3. 可固定在即用型離心柱中。Genovis的GalactEXO是一種外切糖苷酶,含有β-半乳糖苷酶的混合物,可有效去除N-和O-糖基化蛋白或寡糖上的半乳糖殘基。該混合物由兩種半乳糖苷酶組成,可高效水解 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖酶。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的寬pH值范圍內顯示活性。重慶凍干粉形式PNGaseF去糖基化酶生物藥物開發FucosEXO從一組dai表不同鍵的不同寡糖底物中釋放的巖藻糖。FucosEXO對α1-6連接的巖藻糖殘基沒有活性。
我們展示了使用兩種蛋白作為底物的OmniGLYZOR的性能。依那西普是一種 Fc 融合蛋白,含有 TNFα 受體的胞外結構域。該結構域用 2 個 N-糖和 8-11 個 1 個具有不同程度唾液酸化的 O-聚糖修飾。在 37°C 下將這種重糖基化蛋白在 OmniGLYZOR Microspin 柱上孵育 1 小時,可完全去除所有 N-和 O-糖,如中級 LC-MS 分析所示。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種攜帶 3 個 N-聚糖和 1 個he心 1 個 O-聚糖的小蛋白質,其總質量的近 40% 由聚糖組成。O-連接聚糖通常存在于蛋白質的暴露位置,因為它們在蛋白質折疊發生后附著。只有負責其合成的糖基轉移酶才能接觸到這些暴露的位點。
糖蛋白性能測試:O-聚糖的巖藻糖基化參與功能上重要的聚糖表位的合成,例如血型抗原和劉易斯結構。分析用這種復雜的聚糖結構修飾的糖蛋白可能具有挑戰性,需要高效和特異性的酶工具。我們在許多糖基工程TNFR蛋白上測試了Genovis的FucosEXO,這些蛋白攜帶多達11個O-聚糖,這些O-聚糖以不同的鍵裝飾。我們將該活性與其他市售巖藻苷酶進行了比較。FucosEXO 能夠在 1 小時內對所有三種 TNFR 蛋白進行去巖藻糖磺酸處理,而用其他巖藻糖酶處理導致部分去除巖藻糖或根本沒有去除。GalactEXO在天然條件下水解糖蛋白,并在5.5至7.5的寬pH值范圍內顯示活性。
從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性,這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導致N-連接和O-連? 主站蜘蛛池模板: 昆山市| 茂名市| 吉首市| 门源| 上栗县| 浠水县| 江孜县| 抚宁县| 屏边| 灵台县| 巴中市| 方城县| 滨州市| 青冈县| 江华| 平果县| 临颍县| 蒙自县| 长兴县| 兰坪| 鸡泽县| 英山县| 醴陵市| 长子县| 西畴县| 湄潭县| 崇礼县| 南汇区| 醴陵市| 长汀县| 黎川县| 新晃| 江达县| 揭西县| 大兴区| 日喀则市| 尼木县| 固始县| 屏边| 晴隆县| 牙克石市|