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湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

來源: 發布時間:2024年11月05日

與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物,可快速有效地去除抗體、融合蛋白和其他糖基化蛋白上的 N 和簡單的粘蛋白型 O-聚糖。聚糖的去除被用于減少異質性,以促進蛋白質的分析,例如質譜法。去糖基化也可用于研究聚糖的功能作用。N-和粘蛋白型O-連接聚糖的快速高效去糖基化;即用型離心柱形式 - 無酶干擾分析;與LC-MS兼容。與PNGase F類似,Genvois的與PNGase F類似,Genvois的OmniGLYZOR 含有去除 N-糖和最常見的粘蛋白型 O-糖所需的酶,即單唾液酸和二唾液酸he心 1 和 Tn 抗原 (α-GalNAc)。OmniGLYZOR Microspin 小柱中包含以下組分:PNGase?F;O-糖苷酶。PNGase F去除N-糖,被用于MS分析的樣品制備,以降低蛋白質的異質性,分析游離的糖,并研究N-糖的功能作用。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

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Genovis的SialEXO固定化用于復雜糖蛋白的去唾液酸化:在設置反應條件時,需要在所需的反應時間和完成反應所需的酶量之間進行權衡。較高的酶量可保證在更短的時間內完成周轉,但會使下游分析復雜化。為了避免此類問題,我們以離心柱形式固定了活性SialEXO。這允許以更短的孵育時間孵育具有明顯更高量的唾液酸酶的糖蛋白底物。Genovis測試了 SialEXO 凍干和 SialEXO 固定化在人 C1 抑制劑上的性能。這種糖蛋白是一種具有挑戰性的底物,具有 6 個 N- 和多達 26 個 O-聚糖,由 α2,3 和 α2,6 連接的唾液酸修飾。對游離的N-聚糖的分析表明,SialEXO在溶液中完全脫唾液酸化,SialEXO固定化。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究GalactEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,并在大腸桿菌中表達。

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ImpaRATOR 是一種 O-聚糖依賴性蛋白酶,可催化糖蛋白和糖肽中與糖基化絲氨酸或蘇氨酸殘基相鄰的肽鍵的水解。它切割用粘蛋白型O-聚糖修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基的N-末端,包括唾液酸化物種。粘蛋白型O-聚糖是ImpaRAT活性所必需的,該酶不會消化未修飾的絲氨酸或蘇氨酸殘基,也不會在糖蛋白的N-糖基化位點。該酶接受 O-聚糖結構,包括唾液酸化he心 1 和he心 2 結構以及 Tn 抗原。Genovis的ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。

genvois的OpeRATOR 是一種內切蛋白酶,可催化直接靠近 O-聚糖的天然粘蛋白型 O-糖基化蛋白的肽鍵的水解。內切蛋白酶具有高特異性,可消化絲氨酸或蘇氨酸殘基的O-聚糖N端的蛋白質。 OpeRATOR 活性需要粘蛋白型的 O-聚糖,并且該酶不會用 N-連接聚糖消化糖蛋白。該酶對具有亞洲化he心1 O-聚糖的位點z活躍。它還消化唾液酸化的he心 1 和he心 3,但程度要低得多。為了獲得z佳性能,需要去除唾液酸,因此,SialEXO凍干(唾液酸酶混合物)包含在購買中。 ImpaRATOR 來源于銅綠假單胞菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 97 kDa。

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GlycOCATCH用于純化粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽。它是基于無活性的Genovis的OpeRATOR?酶,該酶經過工程改造,可以高親和力結合O-糖基化蛋白和肽。GlycOCATCH的應用包括O糖蛋白和肽的特異性富集或去除、糖組學、復雜樣品的研究和生物制藥的表征。1. 粘蛋白型O-糖基化蛋白和肽的特異性富集;2. 可靠 - 高親和力結合;3. 快速且易于使用的工作流程。不需要輔助因子或特殊緩沖液。GalNAcEXO中的酶來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達,帶有His標簽,分子量為52 kDa。1. 用于方法開發的靈活格式;2. 可以結合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程; 4. 即用型 - 只需加水即可!用于水解糖蛋白上GalNAc殘基的凍干酶。Genovis的GalNAcEXO凍干劑以凍干粉末的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于水解2mg糖蛋白上的GalNAc殘基。PNGase F是一種非常成熟的工具。O-糖的去除可能更具挑戰性,現有的O-糖釋放化學方法不太適合下游分析。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

GalactEXO 是一種β-半乳糖苷酶混合物,可水解 N-和 O-糖基化蛋白中的 β1-3,4-連接末端半乳糖。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

由于蛋白質的O-糖模式的異質性和O-糖結構的OpeRATOR特異性,形成了重疊的肽,從而可以獲得O-糖位點的完整圖譜為了進行比較,相同材料的標準胰蛋白酶消化物, 顯示難以分析的少量且非常大的糖肽。使用Genovis的OpeRATOR進行O-糖位點定位:OpeRATOR 是一種 O-聚糖特異性蛋白酶,可消化絲氨酸和蘇氨酸糖基化位點的粘蛋白型 O-糖蛋白 N 端。這會產生攜帶O-糖的糖肽,并能夠使用質譜法進行O-糖分析、O-糖肽圖譜以及中級分析。下面是OpeRATOR消解位點的示意圖。湖北高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學研究

標簽: 中鹽核酸酶
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