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青海PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

來源: 發(fā)布時間:2025年03月07日

Genovis 是一家瑞典生物技術(shù)公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes?工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學(xué)工具,主要用于生物制藥行業(yè)和學(xué)術(shù)界。 我們在全球范圍內(nèi)提供創(chuàng)新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發(fā)、生產(chǎn)和質(zhì)量控制。您可以在我們的網(wǎng)站上“Application頁面”獲得更多應(yīng)用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯(lián)系我們。?FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。青海PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

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使用Genovis的OpeRATOR圖譜O-聚糖位點對依那西普進行LC-MS分析:依那西普是一種 Fc 融合蛋白,具有高度 O-糖基化的鉸鏈區(qū)域。將依那西普與OpeRAT一起孵育,并使用LC-MS/MS分析所得糖肽。促紅xibao生成素 (EPO) 是一種具有單個 O-糖基化位點的 ~30 kDa 糖蛋白。在PNGase F去除N-糖并使用SialEXO進行去唾液酸化后,用OpeRAT消化天然蛋白,并通過反相LC-MS分析所得蛋白質(zhì)片段。O-糖基化的位點可以通過識別OeRATOR消化位點直接推斷出來。為了獲得良好性能,需要去除唾液酸助劑,因此購買中包括2000個單位(如果SialEXO凍干)。1. 用于方法開發(fā)的靈活產(chǎn)品形式;2. 可以結(jié)合酶以提高效率;3. 適用于自動化工作流程;4. 即用型 - 只需加水即可。O-聚糖是OpeRATOR活性所必需的,而該酶在N-聚糖上沒有活性。OpeRATOR和SialEXO處理后,O-糖基化蛋白被消化成攜帶O-聚糖的肽。消化發(fā)生在O-糖基化位點的N端。山西高活性/無非特異酶活PNGaseF去糖基化酶糖生物學(xué)研究ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。

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OglyZOR 來源于口腔鏈球菌,在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標(biāo)簽,分子量為 227 kDa。SialEXO來源于Akkermansia muciniphila,在大腸桿菌中表達。SialEXO酶含有His標(biāo)簽,組分的分子量分別為42 kDa和66 kDa。1.高效O-糖苷酶;2. 降低樣品異質(zhì)性,揭示潛在的關(guān)鍵蛋白質(zhì)修飾;3. 完全、穩(wěn)健地去除 O-糖he心 1 二糖。Genovis的凍干酶,用于水解糖蛋白上的he心1 O-聚糖。OglyZOR 凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在 2000 個單位的小瓶中,用于在 2 mg 糖蛋白上水解he心 1 O-聚糖。它需要去除唾液酸助劑才能發(fā)揮作用,因此與2000單位的SialEXO凍干一起提供。

對Genovis的ImpaRATOR處理的樣品的分析表明,ImpaRATOR很好地消化了所有三種底物并產(chǎn)生了相似的糖肽,但預(yù)期的聚糖種類不同。用ImpaRATOR處理的樣品比其他樣品含有更多的變異,因為每種肽都檢測到多種聚糖結(jié)構(gòu)。觀察到的聚糖種類主要是單唾液酸化和二唾液酸化he心1結(jié)構(gòu),這與依那西普的預(yù)期一致。用ImpaRATOR或OpeRATOR消化的SialEXO預(yù)處理樣品均產(chǎn)生具有裸核1結(jié)構(gòu)的肽,但攜帶在ImpaRATOR消化樣品中觀察到的Tn抗原的肽T205-P207除外。依那西普用 SialEXO 和 GalactEXO 預(yù)處理,然后用 ImpaRATOR 消化,得到含有 Tn 抗原的肽。總之,這些數(shù)據(jù)證明了ImpaRATOR的高聚糖底物接受度。ImpaRATOR處理的依那西普顯示出與相應(yīng)的去唾液酸化OpeRATOR處理樣品略有不同的消化模式。例如,OpeRATOR在兩個O-糖基化氨基酸之間消化的效率比ImpaRATOR更有效。具有完整唾液酸或Tn抗原的依那西普被OpeRATOR消化得非常弱(數(shù)據(jù)未顯示)。OmniGLYZOR 含有固定化酶的混合物可快速有效地去除抗體、融合蛋白;

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Genovis的FucosEXO 是 α-巖藻糖苷酶的混合物,用于有效水解天然 N-和 O-糖基化蛋白或游離寡糖上的 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接巖藻糖殘基。它是 N-和 O-糖蛋白的聚糖結(jié)構(gòu)分析以及寡糖的外切糖苷酶陣列的寶貴工具。1. 高效α-巖藻糖苷酶混合物 – 快速去除 α1-2、α1-3 和 α1-4-連接的巖藻糖;2. 可靠的酶解增加了對外切糖苷酶陣列的信心;3. 可固定在即用型離心柱中。用于糖蛋白去氟糖基化的凍干酶。Genovis的FucosEXO凍干劑以凍干粉的形式提供,裝在2000單位的小瓶中,用于2mg糖蛋白的去碳基化。SialEXO 2-3唾液酸酶,對 α2-3連接的唾液酸靶向水解。云南用于自動化系統(tǒng)的96孔板形式PNGaseF去糖基化酶瑞典Genovis

水解ɑ2-3-連接唾液酸的凍干酶SialEXO 2-3,裝在500個單位的小瓶中,用于0.5mg糖蛋白的去唾液酸化。青海PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

從依那西普水解β1-3和β1-4半乳糖:Genovis的GalactEXO Immobilized 對 β1-3 和 β1-4 連接的半乳糖均具有酶活性,這些半乳糖存在于裝飾有 N- 和 O-連接糖基化的生物制藥中,例如 Fc-融合蛋白依那西普。將依那西普與GalactEXO固定化孵育60分鐘,并在FabRICATOR消化后使用LC-MS在亞基水平上研究酶活性。TNFR和Fc/2片段分別分析。與GalactEXO Immobilized孵育導(dǎo)致N-連接和O-連接聚糖上的半乳糖殘基水解,這在半乳糖基化物種中被視為信號丟失。對游離的N-聚糖分析證實了LC-MS數(shù)據(jù)。青海PNGaseF去糖基化酶蛋白質(zhì)組學(xué)研究

標(biāo)簽: 中鹽核酸酶
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