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江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

來源: 發布時間:2024年08月20日

Genovis的FabRICATOR(IdeS)酶 可用于 IgG 的所有人類亞類以及人源化和嵌合 IgG。該酶對其他物種的 IgG 也有活性,包括來自大鼠、猴子、兔子和綿羊的某些類別的 IgG。因此,FabRICATOR的高特異性在某些情況下會使其對鉸鏈區域的突變敏感,并損害酶活性。來自小鼠 IgG2a 和 IgG3 的片段可以由 FabRICATOR Z 生成,與 FabRICATOR 相比,FabRICATOR Z 在消化這些 IgG 方面具有更高的效率。然而,小鼠 IgG1 在鉸鏈下方具有不同的序列,并且不被 FabRICATOR Z 消化。對于這種抗體種類,FabULOUS 和 FabULOUS Fab 試劑盒可用于制備 Fab 片段。用于表征zhiliao用途的單克隆抗體、Fc融合蛋白、ADC和生物仿制藥。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

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作為免疫系統的重要組成部分,IgA在自身免疫性疾病、過敏反應、胃腸道疾病等許多不同的健康狀況中發揮作用。在天然條件和復雜生物樣品中選擇性和特異性消化IgA的能力在臨床醫學和研究中具有重要價值。IgASAP酶是降低zhiliao性IgA候選物樣品復雜性并簡化IgA分析表征的寶貴工具。人IgA1和IgA2之間的一個顯著結構差異是鉸鏈區域。與IgA2相比,IgA1具有更長的富含O-聚糖且更靈活的鉸鏈區域。IgASAPSub1的消化位點位于該擴展區域,使酶具有IgA1特異性。IgA2亞類以三種等位基因形式存在,A2m1、A2m2和A2m3。IgASAPSub1+2在脯氨酸(P)和纈氨酸(V)之間消化IgA1和IgA2m1只有N端到鉸鏈區域,但由于A2m2和A2m3中的脯氨酸殘基被精氨酸(R)殘基取代,因此這兩種同種異體型的IgA2對消化具有抗性。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學Genovis的FabDELLO作用于人 IgG1 鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基。

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Genovis是一家瑞典生物技術公司,自2010年起,為生物制藥公司提供SmartEnzymes工具酶。Genovis提供一系列獨特、快速且易于使用的酶學工具,主要用于生物制藥行業和學術界。我們在全球范圍內提供創新的智能酶SmartEnzymes?,用于單克隆抗體、ADC、生物仿制藥和雙特異性生物藥物的開發、生產和質量控制。您可以在我們的網站上“Application頁面”獲得更多應用信息,如果您有興趣,可以和我們一起做一個“SmartStories”,也可以聯系我們。

為了讓所有實驗室都能同時快速自動消化多種抗體,Genovis的FabRICATORMagIC的設計具有靈活性,適用于一系列自動化平臺。我們在ThermoScientific?KingFisher?純化系統上優化了FabRICATORMagIC的工作流程,但它可以轉移到其他自動化平臺,如果沒有自動化,在振動臺上也能同樣出色地工作。消解后,將含有處理樣品的深孔板直接轉移到LC-MS的自動進樣器中進行快速色譜分析,或轉移到其他分析方法進行分析。FabRICATORMagIC與在消解緩沖液中添加0.05%聚山梨醇酯20兼容,以極大限度地減少自動化系統中可能發生的純粹壓力。使用KingFisher儀器處理樣品時,樣品制備非常簡單。將樣品、樹脂和緩沖液移液到指定的孔或板中,然后將板放入儀器中。設計用于FabRICATORMagIC的BindIt?協議將控制每個步驟的孵育溫度和時間。降低樣品處理錯誤的風險,同時提高通量。

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不同于IdeS,Genovis的FabDELLO 是一種蛋白酶,可在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1,在兩小時內產生完整的 Fab 和 Fc 片段,無需還原條件。該酶對具有突變鉸鏈區域的抗體(如 LALA 突變)具有活性,并啟用中級 LC-MS 來表征具有突變鉸鏈的抗體的關鍵質量屬性。FabDELLO 在鉸鏈上方的單個位點消化人 IgG1 (...KSCDK / THTCPPCP...),生成完整的 Fab 和 Fc 片段。FabDELLO 是一種賴氨酸特異性蛋白酶。單個消化位點是人 IgG1 的三維結構的結果,使這種賴氨酸暴露于酶中。如果去除N-聚糖,則Fc上暴露的賴氨酸處可能會出現額外的消化位點。FabDELLO在天然條件下具有活性,需要鈣離子的存在。在37°C和pH 7-8.5下獲得良好活性。FabDELLO 是從 Bdellovibrio 細菌克隆而來的,并在大腸桿菌中表達。該酶含有 His 標簽,分子量為 32 kDa。Genovis將固定化酶固定在磁珠上,用于在鉸鏈下方自動消化 IgG。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis的IgASAP 是 IgA 消化酶家族。IgASAP Sub1 是一種 IgA1 特異性酶。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用,需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段,但非特異性酶活性需要仔細優化,以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點,可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 (HOS) 的 NMR 研究、結合研究等。在這里,我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化,用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊,因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率,在加入SDS上樣緩沖液之前,停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。江西IgGZEROIdeS蛋白酶蛋白組學

標簽: 中鹽核酸酶
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