與IdeS不同，融合蛋白是通過將兩種或多種蛋白質或肽的功能組合成一個量身定制的分子來創造的，以專門應對挑戰。連接此類蛋白質或肽結構域的常見方法是包含柔性連接子。這些連接子通常富含甘氨酸，例如甘氨酸殘基（G），或甘氨酸殘基散布絲氨酸殘基（GS）以形成重復序列。這為連接子提供了足夠的靈活性，不會干擾連接蛋白質結構域的功能。然而，這些新模式帶來了新的分析挑戰，需要新的工具來促進表征和產品質量監測。中級分析已成為分析單克隆抗體療法的標準方法，涉及將分子消化成幾個定義的亞基。它們足夠小，可以獲得高質量的質譜圖，并為產品質量屬性提供特定領域的信息。由于G和GS連接子對常見蛋白酶的降解具有抗性，因此很難分離結構域以進行深入分析。因此，Genovis開發了GlySERIAS，不同于IdeS酶，一種消化柔性富含甘氨酸的連接子的酶。GlySERIAS可以分離不同的功能域，并實現對融合蛋白、多特異性抗體和含有富含甘氨酸的連接子的各種mAb片段進行詳細表征的中級方法。用于抗體療法（如mAb、ADC和Fc融合蛋白）的表征、質量控制、生產監測。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

對于涉及完整Fab或Fc抗體片段的應用，需要在抗體鉸鏈處進行消化。木瓜蛋白酶和 Lys-C 等傳統酶可用于生成 Fab 片段，但非特異性酶活性需要仔細優化，以極大限度地降低多個消化位點的風險。Genovis的SmartEnzymes IgG 蛋白酶 GingisKHAN 和 FabALACTICA 具有一個消化位點，可從人 IgG1 生成均質的 Fab 和 Fc 抗體片段。生成的片段可用于結晶和高階結構 （HOS） 的 NMR 研究、結合研究等。在這里，我們提出了獲得完整Fab和Fc抗體片段的不同策略。所得片段顯示 GingisKHAN 的有效消化，用于生成完整的 Fab 片段或從依那西普上的融合 TNFR 結構域中分離 Fc。由于 GingisKHAN 的特異性消化依賴于 IgG 的天然折疊，因此在變性條件下特異性受到負面影響。為了使用SDS-PAGE分析消解效率，在加入SDS上樣緩沖液之前，停止在分析樣品中加入碘乙酰胺的反應。Genovis同時提供IdeS酶的純化試劑盒。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學可精確定位特定的修飾。而無需肽圖分析，可以較少的手動操作時間快速完成。

Genovis的FabDELLO在鉸鏈上方的單個位點消化人IgG1，并在兩小時內生成均質的Fab和Fc片段（Genovis的IdeS在鉸鏈區下方的單個位點進行消化）。生成的片段可用于結晶和高階結構（HOS）的NMR研究、結合研究等。突變的鉸鏈區域是zhiliao性候選抗體的常見修飾，以降低效應器功能。這些突變可能會影響具有高底物特異性的酶的抗體消化效率。例如，高度特異性的FabRICATOR（IdeS）消化效率對含有常見LALA突變的抗體產生負面影響。FabDELLO作用于人IgG1鉸鏈上方的單個暴露賴氨酸殘基，能夠對具有突變鉸鏈區域的抗體進行流行的中級LC-MS分析。例如，用FabDELLO消化市售的IgG1risankizumab，在下鉸鏈區域具有LALA突變，并通過反相LC-MS進行分析。消化產生均勻的Fab和Fc片段。用20mMDTT還原片段，用于中級LC-MS分析，發現產生了均相的Fc/2、輕鏈（LC）和Fd片段。用FabDELLO消化后觀察到的定義峰顯示出均勻的片段生成和酶的穩健性能。

Genovis的半胱氨酸蛋白酶 FabALACTICA （IgdE）與IdeS酶一樣是特異性蛋白酶。在二維核磁共振波譜 （2D-NMR） 之后，可以通過 HOS 分析在精確的原子水平上評估 mAb 的關鍵質量屬性。從Genovis的FabALACTICA Immobilized獲得均相Fab和Fc片段的工作流程，是評估嵌合單克隆抗體英夫利昔單抗中HOS的理想選擇，在海報“FabALACTICA產生純和均相的mAb亞基，促進2D-NMR波譜分析”中進行了描述。來自生成的 Fab 和 Fc 片段的高質量信號和光譜分辨率導致能夠觀察 Fab 和 Fc 之間的結構變化、氧化和非氧化樣品之間的差異，并通過觀察原子分辨率來比較原研劑和生物仿制藥的 HOS。FabRICATOR（IdeS蛋白酶）的一大優勢是速度！

Genovis提供凍干和固定化的FabRICATOR（IdeS），為客戶提供了許多選擇，以滿足他們的需求。 凍干形式用于高度靈活的方法開發的目的，并隨時準備使用，只需重組和添加到IgG樣本。 凍干酶的靈活性也意味著它可以應用于更高的通量和自動化的工作流程。 Genovis還提供了在瓊脂糖樹脂上固定化的酶，在隨時可用的旋轉柱中，這可以極大限度地減少在樣品中殘留的酶，這可能是有利的。 對于更多的制備應用，我們提供FabRICATOR Fab2試劑盒，這是IgG片段生成和純化的強大工具。 這包括FabRICATOR固定化柱和CaptureSelect Fc純化柱，用于亞基的親和純化。 由于FabRICATOR在非還原條件下是活性的，F(ab’)2片段保留其鏈間和鏈內二硫鍵，如果片段想用于結合研究，這一點尤為重要，因為結合效率和免疫反應性將被保留。IgASAP Sub1+2 在脯氨酸 （P） 和纈氨酸 （V） 之間消化 IgA1 和 IgA2m1。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

有效消化，適用于靈敏的體內或基于細胞的檢測。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學

Genovis酶的適應性和更高的通量和自動化工作流程的中級方法，這是非常重要的。 隨著分析方法和儀器的改進，在表征實驗室中有更大的能力進行更多類型的分析，或者在工藝開發或QC實驗室中有更先進的分析儀器。 當涉及到能夠支持大量樣本分析的活動時，例如克隆篩選，工藝開發和驗證以及穩定性研究，這是非常好的。 此外，Genovis產品的效率、健壯性（Robust）和易用性使它們更容易應用于這些類型的工作，而且，也適用于受控環境中的批次放行方法。Genovis的產品很好地支持這種類型的工作，這也促使Genovis不斷推出新產品和現有產品的不同形式，以支持客戶的工作。四川FabULOUSIdeS蛋白酶蛋白組學