冷凍電鏡技術的應用場景:冷凍電鏡主要應用在結構生物學和材料科學當中,如在2020戴口罩戴口罩中研究人員通過冷凍電鏡技術在解析病毒結構、推測其侵染人體細胞的路徑等傳播原理發揮了重要作用,研究人員將戴口罩的結構與其他幾種冠狀病毒進行了比較,發現2019-nCoV的S蛋白整體結構與SARS病毒S蛋白的整體結構相似,各個結構之間具有高度同源性。在材料科學的應用中,冷凍電鏡技術在一些對電子束、熱敏感材料,如鈣鈦礦材料、某些高分子材料、水凝膠、量子點等精細結構的物理表征與機理研究中也具有巨大的應用潛力。冷凍電鏡技術可以通過揭示細胞里發生的生命過程細節,幫助人們了解很多有意思的生物學現象。合肥冷凍透射電鏡技術服務
冷凍電鏡技術未來之路在何方?除了蛋白等生物大分子外,生物樣品還有很重要的一面是細胞和組織。即使是目前有很多重要的蛋白結構都得到了埃米級別的解析,但由于它們都是純化出來的,已經脫離了原來位置,就如同一片樹葉脫離了大樹,研究的再深刻,目前也只是一葉遮目,不要說推測這片樹葉在森林里的位置,即使是在哪顆特定大樹上的生長部位和結構都很難說。因此解析細胞或組織這樣大尺度的高分辨精細結構具有更普遍的生物學意義。合肥冷凍透射電鏡技術服務基于結構的藥物設計已經逐漸成為藥物開發設計的主流,與此同時冷凍電鏡技術也在蓬勃發展。
冷凍電鏡技術究竟是什么呢?一直以來,科學家們不斷進行基礎生命科學的探究,探究細胞內的生命規律,為人類健康及其他學科提供借鑒。而分子是生命體中行使功能的較小單元,生命科學研究也逐步發展到了微觀生物分子的結構與功能研究階段,以期逐步加深對生命過程的認知。充分的基礎研究不只能幫助我們深刻認識生命過程,并且能夠幫助改善人類健康和提高人類生活質量。科學家們能夠通過生命科學研究幫助確定新的藥物靶點,并進行基于靶點的藥物篩選,提高藥物研究的成功率、安全性和有效性。并且隨著生物制品尤其抗體大分子藥物的發展,冷凍電鏡技術越來越多地應用于活性生物分子結構的解析中。
單顆粒冷凍電鏡技術:生物大分子快速冷凍后,在低溫下利用透射電子顯微鏡對結構均一、分散的全同樣品顆粒進行成像,再經圖像處理及重構計算獲得樣品的三維結構。可研究生物大分子在溶液中的結構及構象變化、無需結晶、所需樣品量相對較少,適合于蛋白質、病毒等生物大分子及其復合物的結構生物學研究。樣品制備:可以根據樣品、電鏡載網和其他使用條件,摸索合適的單顆粒樣品制備條件,純化、收集濃度范圍從幾微升50nM至5uM濃度的蛋白溶液來制備單顆粒電鏡樣品。在-196℃時,組織中的生物大分子能夠長期保持穩定性、細胞活性及組織微觀結構,同時,在低溫下,生物樣品耐受電子輻照劑量增強,且其在電鏡鏡筒的高真空環境中脫水變形的問題也得以解決。Vitrobot和EMGP2均能夠提供快速、簡單、可重復的安自動化樣品玻璃化制備過程,其在恒定的物理和機械條件下(如溫度、相對濕度、吸濕條件和冷凍速度)對樣品進行冷凍固定確保生物樣品在低溫狀態下仍保持天然構象。冷凍電鏡技術之冷凍透射電鏡優點:透鏡多,光學性能好。
冷凍電鏡技術的獨特優勢:1、更接近天然狀態:電子斷層成像技術則可用來研究一定厚度的亞細胞器在天然狀態下的內部結構,不需要蛋白質結晶。2、適用研究對象普遍:冷凍電鏡單粒子法既可以對具有對稱結構的大分子進行研究,也適合于研究結構不規則的大分子復合物,對于分子量的上限沒有限制,理論上>100kD的分子在成像技術能夠保證的情況下可以形成足夠的對比以進行圖像校正。冷凍電鏡技術作為一種重要的結構生物學研究方法,它與X射線晶體學、核磁共振一起構成了結構生物學研究的基礎。冷凍電鏡技術之冷凍透射電鏡是將樣品冷卻到液氮溫度,用于觀測蛋白、生物切片等對溫度敏感的樣品。合肥冷凍透射電鏡技術服務
冷凍電鏡技術,是用于掃描電鏡的很低溫冷凍制樣及傳輸技術。合肥冷凍透射電鏡技術服務
冷凍電鏡技術的儀器結構:(1)圖像記錄系統:收集來自樣品的電子信號,在熒光屏上形成圖像。(2)電子槍:產生電子束的部分,聚光鏡系統負責將電子束聚焦到樣本樣品上。(3)圖像生成系統:由物鏡,中間和投影儀鏡頭以及可移動平臺組成。冷凍電鏡已經能解析出生物大分子的原子級分辨率(0.2-0.3nm)結構,但是這一結果離物理極限還有較大距離。長久以來,冷凍電鏡在結構生物學領域取得了巨大成功,目前,多構象蛋白的三維分類問題和生物大分子的動力學分析依然是充滿挑戰的研究方向,新型的算法發展也將主要圍繞這些問題展開。而作為一種低信號源激發測試技術,冷凍電鏡技術在一些對電子束、熱敏感材料,如鈣鈦礦材料、某些高分子材料、水凝膠、量子點等精細結構的物理表征與機理研究中也具有巨大的應用潛力。他山之石,可以攻玉。隨著硬件設備與模擬算法的改進,這項帶著結構生物化學研究邁入新紀元的技術,未來必定擁有更加廣闊的應用前景。合肥冷凍透射電鏡技術服務