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Recombinant Human CLEC4M/CD299 Protein

來源: 發布時間:2024年09月22日

確保N末端His標簽的泛素蛋白在實驗中的活性和穩定性,需要考慮以下幾個關鍵因素:1.**儲存條件**:按照生產商的建議,將重組泛素蛋白凍干粉儲存在-25~-15℃的條件下,以保持其穩定性和活性。2.**避免反復凍融**:多次凍融會降低蛋白質的穩定性和活性。建議在使用后將剩余的蛋白質分裝并儲存在推薦的條件下。3.**復溶條件**:按照產品說明,使用無菌蒸餾水或推薦的緩沖液將蛋白質復溶至適當的濃度。通常建議添加0.1%BSA以增加蛋白質的溶解度和穩定性。4.**使用前離心**:在使用前,將蛋白質溶液短暫離心,以確保所有組分都沉積在底部,避免取樣時的不均勻性。5.**工作濃度和體積**:根據實驗設計,將蛋白質稀釋至工作濃度,并盡量使用小體積以減少蛋白質的降解。6.**避免蛋白降解**:在實驗過程中,使用蛋白酶抑制劑以防止蛋白降解酶對重組泛素蛋白的降解。7.**避免氧化**:在蛋白質的儲存和使用過程中,避免氧化,可以通過添加抗氧化劑如DTT或TCEP。8.**避免污染**:使用無菌技術操作,確保實驗器材和環境的清潔,避免微生物污染。9.**操作環境**:在4℃或冰上進行操作,以減少蛋白質降解和非特異性相互作用。通過SDS-PAGE、Western blot、質譜等方法驗證蛋白的純度和分子量。通過活性測試評估蛋白的生物活性。Recombinant Human CLEC4M/CD299 Protein,His-Flag Tag

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重組人血清白蛋白(rHSA)是通過植物表達系統生產的細胞培養級產品,在科研領域有著廣泛的應用。以下是rHSA在科研中的一些主要應用:1.**細胞培養**:rHSA是細胞培養中的重要成分,它可以作為血清替代品,促進細胞生長和維持細胞培養環境的穩定性。由于其無動物源成分,可以減少血清中可能存在的病毒污染風險,適用于需要高生物安全性的細胞培養研究。2.**藥物載體**:rHSA因其良好的生物相容性和藥物結合能力,被用作藥物載體,有助于提高藥物的穩定性、延長藥物的半衰期,并可能改善藥物的靶向性。3.**疫苗保護劑**:在疫苗開發中,rHSA可以用作保護劑,有助于提高疫苗的穩定性和有效性。4.**細胞凍存保護劑**:rHSA在細胞凍存過程中起到保護作用,有助于提高細胞復蘇后的存活率。5.**醫療器械包埋劑**:在醫療器械領域,rHSA可以作為包埋劑,用于藥物洗脫支架或其他植入式醫療設備。6.**生物制藥**:rHSA在生物制藥生產中作為穩定劑和保護劑,有助于提高蛋白質藥物的穩定性和療效。7.**基因**:在基因領域,rHSA可能被用作基因載體,幫助基因傳遞至目標細胞。8.**化妝品添加劑**:在化妝品行業,rHSA可能因其保濕和修復特性而被用作添加劑。Recombinant Human TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag牛痘DNA拓撲異構酶I可以用于PCR產物的克隆,通過其識別序列在引物設計中引入,實現擴增后的DNA片段連接 。

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酵母重組表達的PNGaseF(N-糖苷酶F)是一種用于蛋白質去糖基化實驗的酰胺水解酶,具有以下特點以確保實驗中的活性和穩定性:1.**高效性**:具有高比活性,例如750000U/mL,這有助于快速高效地進行去糖基化反應。2.**穩定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,比較好的活性和穩定性可維持長達24個月。3.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**:建議在-15~-25℃保存,有效期1年。5.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**:提供了使用說明,包括變性和非變性條件下的蛋白質去糖基化步驟。7.**His標簽**:產品帶有His標簽,便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應**:有些產品如FastPNGaseF,可以在數分鐘內完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**:產品供科研使用,操作時應穿戴適當的實驗室防護裝備。遵循這些指導原則和產品說明,可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩定性,從而獲得可靠的去糖基化結果。

SpCas9蛋白(來自化膿性鏈球菌的Cas9蛋白)在基因編輯中的主要作用是作為核酸酶,能夠精確地切割目標DNA序列。以下是SpCas9在基因編輯中的幾個關鍵步驟和作用:1.**識別和結合**:SpCas9蛋白與一個單導向RNA(sgRNA)結合,形成RNP復合物。這個復合物能夠識別并結合到基因組中與sgRNA互補的特定DNA序列。2.**PAM序列識別**:SpCas9需要一個稱為原間隔子相鄰基序(PAM)的特定序列作為識別目標DNA的先決條件。對于SpCas9,這個PAM序列通常是5'-NGG-3'。3.**DNA切割**:一旦RNP復合物與目標DNA結合,SpCas9就會在PAM序列的3個堿基對的上游位置切割DNA雙鏈,產生一個雙鏈斷裂(DSB)。4.**引發DNA修復**:DNA雙鏈斷裂觸發細胞的DNA修復機制,包括同源定向修復(HDR)和非同源末端連接(NHEJ)。研究人員可以利用這些修復機制來插入、刪除或替換特定的DNA序列。5.**基因修改**:通過HDR,可以在斷裂的DNA兩端引入特定的DNA模板,從而實現精確的基因編輯。而NHEJ通常會導致小的插入或缺失(indel),這可以用來產生基因的敲除或敲入。6.**提高編輯效率**:為了提高SpCas9的編輯效率,研究人員可能會使用優化的sgRNA設計、蛋白質工程或嵌合融合蛋白等策略。

泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成靶蛋白-泛素復合物。

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PreScissionProtease(PSP)是一種在蛋白質純化和分析中使用的酶,具有以下特點:1.**特異性識別**:PSP能在低溫(4°C)下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro,并在Gln和Gly之間進行酶切。2.**應用**:PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標簽,有助于純化目的蛋白。3.**純度高**:PSP的純度達到95%以上,確保了實驗的準確性和重復性。4.**穩定性好**:PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中,-80℃長期儲存,有效期2年;小量分裝-20℃保存,有效期6個月。5.**酶活定義**:在5℃條件下反應16小時,能夠切割100μg的GST標簽蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。6.**兼容性強**:PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40,10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項**:某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優化酶切效率**:建議進行預實驗摸索實驗濃度,實際操作中,建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。牛痘DNA拓撲異構酶I具有解超螺旋的活性,可以解開雙鏈閉合環狀DNA的超螺旋結構,便于后續的酶切反應。磁珠法mRNA純化試劑盒

泛素從E1轉移到泛素結合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。Recombinant Human CLEC4M/CD299 Protein,His-Flag Tag

在基因編輯中,除了NLS-Cas9-EGFPNuclease,還有多種技術可以提高編輯的特異性,這些技術包括:1.**高保真Cas9變體**:通過工程化改造Cas9蛋白,例如使用SpCas9-HF1或eSpCas9等高保真變體,可以減少脫靶效應,提高特異性。2.**堿基編輯器(BaseEditors)**:這類編輯器可以在不產生DNA雙鏈斷裂的情況下直接在特定位置進行單個堿基的轉換,從而減少非目標編輯。3.**引導編輯器(PrimeEditors)**:由哈佛大學劉如謙教授團隊開發的引導編輯器可以在不依賴DNA雙鏈斷裂和同源定向修復的情況下,實現精細的基因組編輯。4.**CRISPRi和CRISPRa**:這兩種技術分別用于抑制或激起特定基因的表達,而不切割DNA,從而減少了脫靶風險。5.**新型CRISPR系統**:例如CRISPR/Cas12j和CRISPR/CasΦ,這些系統可能具有不同的PAM序列要求和更高的特異性。6.**AI輔助設計**:利用人工智能預測和優化sgRNA的設計,以減少脫靶效應。7.**優化遞送系統**:改進CRISPR組分的遞送方法,例如使用核糖核的蛋白(RNP)復合物,可以提高編輯效率和特異性。8.轉座子編輯系統:利用轉座子進行基因組編輯,可以在不依賴DNA雙鏈斷裂的情況下實現大片段DNA序列的插入。

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