免疫組化的顯色系統(tǒng)

免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見(jiàn)信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB（3,3'-二氨基聯(lián)苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀，適用于光學(xué)顯微鏡觀察，但不適合長(zhǎng)期保存。此外，還有熒光顯色系統(tǒng)，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 英瀚斯生物實(shí)驗(yàn)外包，多種病理染色熟練掌握，可做免疫組化！湖北做得好的免疫組化要多少錢

免疫組化如何才能充分脫蠟？

 （1）蠟不溶于水，如果脫蠟不干凈，少許蠟存留于切片上，將會(huì)引起染色不均勻、陽(yáng)性物時(shí)隱時(shí)現(xiàn)、真假難辨、背景染色增加等。為了解決上述的問(wèn)題，切片在染色前必須徹底脫蠟，目前用于脫蠟的試劑主要是二甲苯，因它脫蠟力強(qiáng)，脫蠟時(shí)間較短； 

（2）脫蠟的時(shí)間要根據(jù)季節(jié)，室溫和試劑的新鮮謀面是在不同。如果在夏天，室溫較高，脫蠟試劑也新鮮，則脫蠟時(shí)間不需很多，3-5分鐘就已足夠。如果在冬天，室溫較低，脫蠟試劑也較陳舊，則脫蠟時(shí)間需要延長(zhǎng)，10-20分鐘或更長(zhǎng)。

（3）當(dāng)天切的切片，燒烤2小時(shí)后進(jìn)行染色，切片帶有溫度進(jìn)行脫蠟這將可加速脫蠟的過(guò)程，如果預(yù)先切好烤好的切片，在染色前，還必須對(duì)切片進(jìn)行加溫10-20分鐘，然后再行脫蠟，這樣脫蠟速度加快，效果魁偉更好。總之，操作時(shí)應(yīng)根據(jù)不同的季節(jié)，不同的室溫，不同的試劑來(lái)決定，脫蠟的時(shí)間，原則上是要徹底、干凈、完全地脫去切片上的蠟。

切片染色更多問(wèn)題匯總，關(guān)注英瀚斯生物。 貴州動(dòng)物組織免疫組化免疫組化怎么做？步驟方法？

免疫組化的特點(diǎn)：

1）特異性強(qiáng)。免疫學(xué)的基本原理決定抗原與抗體之間的結(jié)合具有高度特異性，因此，免疫組化從理論上講也是組織細(xì)胞中抗原的特定顯示，如角蛋白（keratin）顯示上皮成分，LCA顯示淋巴細(xì)胞成分。只有當(dāng)組織細(xì)胞中存在交叉抗原時(shí)，才會(huì)出現(xiàn)交叉反應(yīng)。

2）敏感性高。在應(yīng)用免疫組化的起始階段，由于技術(shù)上的限制，只有直接法、間接法等敏感性不高的技術(shù)，那時(shí)的抗體只能稀釋幾倍、幾十倍；現(xiàn)在由于ABC法或SP三步法的出現(xiàn)，使抗體稀釋上千倍、上萬(wàn)倍甚至上億倍仍可在組織細(xì)胞中與抗原結(jié)合，這樣高敏感性的抗體抗原反應(yīng)，使免疫組化方法越來(lái)越方便地應(yīng)用于常規(guī)病理診斷工作。

3）定位準(zhǔn)確、形態(tài)與功能相結(jié)合。該技術(shù)通過(guò)抗原抗體反應(yīng)及呈色反應(yīng)，可在組織和細(xì)胞中進(jìn)行抗原的準(zhǔn)確定位，因而可同時(shí)對(duì)不同抗原在同一組織或細(xì)胞中進(jìn)行定位觀察，這樣就可以進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究，對(duì)病理學(xué)領(lǐng)域開(kāi)展深入研究是十分有意義的。

英瀚斯生物，自建病理平臺(tái)實(shí)驗(yàn)室，專業(yè)免疫組化。

免疫組化的局限性，可能會(huì)有假陽(yáng)性。陽(yáng)性信號(hào)定位不正確即為假陽(yáng)性，包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng)，另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。假陽(yáng)性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用，過(guò)期的抗體或者不著色，或者背景著色，形成假陽(yáng)性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短，冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過(guò)程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影，產(chǎn)生假陽(yáng)性;(5)3，3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng)，DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用，配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì)，因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色，如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色，可以通過(guò)血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見(jiàn)于壞死組織中，使壞死組織呈較高的背景染色，在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。關(guān)于免疫組化的常見(jiàn)問(wèn)題匯總。

細(xì)胞屬性的判定，免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過(guò)特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分，來(lái)判定細(xì)胞的屬性，確定cancer的來(lái)源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記，CK陽(yáng)性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽(yáng)性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見(jiàn)于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽(yáng)性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽(yáng)性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽(yáng)性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽(yáng)性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包，可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。英瀚斯生物做免疫組化怎么樣？貴州動(dòng)物組織免疫組化

免疫組化樣本如何處理？湖北做得好的免疫組化要多少錢

免疫組化結(jié)果要如何分析？

 （1）陽(yáng)性著色細(xì)胞計(jì)數(shù)法。在40*光鏡下，隨機(jī)選擇不重疊的10個(gè)視野，機(jī)器或人工計(jì)數(shù)陽(yáng)性著色細(xì)胞，每組3~6張不同動(dòng)物組織切片，然后進(jìn)行組間比較即可。

（2）灰密度分析法。可以通過(guò)在不同組別和不同動(dòng)物組織切片上選擇相同區(qū)域、相同條件下用image j進(jìn)行灰密度分析，然后進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析即可。

（3）評(píng)分法。用光學(xué)顯微鏡下對(duì)組織切片分別按染色程度（0~3分為陰性著色、淡黃色、淺褐色、深褐色）、陽(yáng)性范圍進(jìn)行評(píng)分（1~4分為0~25%、26~50%、51~75%、76~100%），**終可以分?jǐn)?shù)相加，再進(jìn)行比較。對(duì)于以上這幾種方法，各有利弊，請(qǐng)細(xì)心選擇。要想得到正確結(jié)果的前提是你要做出著色均勻、背景很淺的高質(zhì)量切片。

英瀚斯生物，專業(yè)病理染色團(tuán)隊(duì)，不止做檢測(cè)，還有專業(yè)病理分析。 湖北做得好的免疫組化要多少錢