免疫組化分類中,免疫熒光方法,英瀚斯生物為您進(jìn)行介紹。一開始建立的免疫組織化學(xué)技術(shù)。它利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理,先將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察。當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后即會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可確定組織中某種抗原的定位,進(jìn)而還可進(jìn)行定量分析。由于免疫熒光技術(shù)特異性強(qiáng)、靈敏度高、快速簡(jiǎn)便,所以在臨床病理診斷、檢驗(yàn)中應(yīng)用比較廣。英瀚斯生物,專業(yè)病理染色切片平臺(tái),免疫組化效果好!內(nèi)蒙古什么是免疫組化
免疫組化的局限性,可能會(huì)有假陽性。陽性信號(hào)定位不正確即為假陽性,包括著色不勻、背景著色、邊緣效應(yīng),另外組織的某些特定成分也能導(dǎo)致假陽性結(jié)果。假陽性可能的原因有:(1)一抗?jié)舛燃耙豢故欠袷В贵w有一個(gè)合適的濃度范圍且必須在有效期內(nèi)使用,過期的抗體或者不著色,或者背景著色,形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織,組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時(shí)間過長(zhǎng),由于室溫的影響夏季孵育時(shí)間稍短,冬季孵育時(shí)間稍長(zhǎng);(4)操作過程中組織變干,造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影,產(chǎn)生假陽性;(5)3,3'-二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色時(shí)間太長(zhǎng),DAB宜現(xiàn)配現(xiàn)用,配制時(shí)間比較好在30min以內(nèi);(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質(zhì),因此間質(zhì)和胞漿中出現(xiàn)很多非特異性的染色,如內(nèi)源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色,可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細(xì)胞、淋巴細(xì)胞也會(huì)產(chǎn)生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中,使壞死組織呈較高的背景染色,在免疫組化中應(yīng)避免選擇壞死組織較多的蠟塊。安徽動(dòng)物組織免疫組化要多少錢免疫組化IHC詳細(xì)介紹!
免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
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(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長(zhǎng)二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。
確定來源不明的轉(zhuǎn)移瘤的原發(fā)部位,臨床上免疫組化也可以進(jìn)行操作。對(duì)于來源不明的轉(zhuǎn)移瘤,用免疫組化技術(shù)有助于確定惡性cancer的組織學(xué)來源,進(jìn)一步確定原發(fā)部位。如角蛋白抗體(CK20)在胃腸道cancer、膽管cancer、胰腺cancer中陽性,而在肺cancer、乳腺cancer、腎cancer中陰性;Tg陽性可考慮甲狀腺轉(zhuǎn)移;波形蛋白(Vimentin)陽性支持肉瘤的診斷;前列腺特異性抗原(PSA)陽性可考慮前列腺轉(zhuǎn)移;甲狀腺球蛋白陽性可考慮甲狀腺濾泡細(xì)胞cancer;肌動(dòng)蛋白(Actin)、肌球蛋白(Myosin)、結(jié)蛋白(Desmin)、肌紅蛋白(Myoglobin)陽性可考慮橫紋肌肉瘤;S-100蛋白陽性支持黑色素瘤的診斷;等等這些都為cancer的醫(yī)療及預(yù)后提供了依據(jù)。有沒有推薦的免疫組化外包公司?
免疫組化的顯色系統(tǒng)
免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB(3,3'-二氨基聯(lián)苯胺)和AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察,但不適合長(zhǎng)期保存。此外,還有熒光顯色系統(tǒng),如FITC(異硫氰酸熒光素)和TRITC(四甲基羅丹明異硫氰酸酯),適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 英瀚斯生物,專業(yè)病理老師負(fù)責(zé)免疫組化外包!貴州小鼠免疫組化怎么樣
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免疫組化技術(shù)應(yīng)用于臨床cancer良惡性的判斷,英瀚斯生物為您介紹。對(duì)于反應(yīng)性增生還是cancer性增生,可用免疫球蛋白(Ig)的輕鏈抗體檢測(cè)B淋巴細(xì)胞增生的單克隆或多克隆性來區(qū)別。在濾泡反應(yīng)性增生時(shí),濾泡反應(yīng)中心的細(xì)胞不表達(dá)細(xì)胞凋亡蛋白(bcl-2),bcl-2陰性;而在濾泡性淋巴瘤中,由于90%以上cancer性濾泡細(xì)胞有bcl-2的高表達(dá),bcl-2陽性。而增殖細(xì)胞核抗原(PCNA),周期素(Cycling),核抗原(Ki-67)通過對(duì)cancer細(xì)胞增生的程度作出評(píng)價(jià),從而提示增生細(xì)胞的良惡性。內(nèi)蒙古什么是免疫組化