目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。

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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發展起來的技術?；驹硎窍纫悦笜擞浀目贵w與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前**常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統等。

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醫療和預后有關的免疫組化。與醫療及預后有關的標記物主要分以下為三類:(1)cancer基因標記物:如cancer基因C-erbB2、c-myc、P53蛋白等，卵巢上皮性cancer中P53的過表達與cancer的擴散、分化、術后殘存cancer灶呈正相關;乳腺cancer中表達C-erbB2的浸潤性cancer患者預后差;肺cancer中突變型P53基因蛋白表達增高，PTEN基因表達減弱，提示cancer預后不良。(2)細胞增殖性標記物:cancer細胞增生是否活躍直接影響著臨床的醫療與預后，如表皮生長因子受體(EGFR)、Ki-67、PCNA、cycling等可對cancer細胞的增生做出評價，表達指數越高，表明其增殖指數越活躍，惡性度增高，預后不良，其中以惡性淋巴瘤乳腺cancer較為明顯;在對乳腺cancer的研究中發現Ki-67、EGFR陽性者，淋巴結轉移率高，并與ji素受體的表達呈負相關。(3)類固醇ji素受體:如雌ji素受體(ER)、孕ji素受體(PR)等，應用更為范圍廣的的是子宮內膜cancer及乳腺cancer，如對乳腺cancer中ER、PR的檢測，有助于決定臨床醫療中是否需要加入內分泌ji素阻斷醫療，并能判斷預后，ER及PR陽性表達、原cancer基因(C-erbB-2)陰性表達病例對三苯氧胺等ji素醫療反應良好，而ERPR、C-erbB-2三種抗體均陰性(TNBC)患者采用三苯氧胺可能意義不大。免疫組化病理免疫組化多少錢？

細胞爬片免疫組化檢測實驗步驟

1、選擇貼壁良好的細胞爬片，用4%多聚甲醛固定后15min后自然晾干。

2、PBS洗3次，每次5min。3、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

4、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

5、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

6、PBS洗3次，每次5min。

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7、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

8、PBS洗3次，每次5min。

9、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

10、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

11、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。

細胞屬性的判定，免疫組化也可以進行這方面的臨床應用。通過特定抗體標記出細胞內相應的抗原成分，來判定細胞的屬性，確定cancer的來源。如細胞角蛋白(CK)是上皮性標記，CK陽性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質纖維酸性蛋白(GFAP)陽性則提示膠質cancer;CD20和CD79a陽性則提示B細胞淋巴瘤;平滑肌肌動蛋白(Actin)陽性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質瘤中原cancer基因蛋白產物CD117陽性;血管源性cancer中內皮細胞標記物CD34陽性等等。如果您需要做實驗外包，可以與我們英瀚斯生物進行聯系。英瀚斯生物，組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報告分析，一站式搞定！

確定cancer分期，免疫組化技術應用于臨床可以進行處理哦，英瀚斯生物為您處理。cancer分期是判斷預后的一個指標，與是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲密切相關，而通過免疫組化方法可以判斷cancer是否浸潤、有無淋巴管或血管侵襲。層黏連蛋白和Ⅳ型膠原的單克隆抗體可以清楚的顯示基膜的主要成分，用于區分原位*和浸潤*，一旦上皮性*突破基膜為浸潤，未突破基膜為原位;顯示血管和淋巴管內皮細胞的標記物第八因子相關蛋白、D2-40等則可清楚顯示cancer對血管或淋巴管的浸潤。因此對許多cancer的良惡性鑒別及有無血管或淋巴管浸潤，免疫組化結果作為主要的鑒別依據。做免疫組化需要多少錢？山西免疫組化實驗

免疫組化的樣本保存要求是什么？免疫組化

免疫組化的局限性，可能會有假陽性。陽性信號定位不正確即為假陽性，包括著色不勻、背景著色、邊緣效應，另外組織的某些特定成分也能導致假陽性結果。假陽性可能的原因有:(1)一抗濃度及一抗是否失效，抗體有一個合適的濃度范圍且必須在有效期內使用，過期的抗體或者不著色，或者背景著色，形成假陽性;(2)試劑未充分覆蓋組織，組織邊緣的試劑易干濃度較組織中間高致深染;(3)抗體孵育時間過長，由于室溫的影響夏季孵育時間稍短，冬季孵育時間稍長;(4)操作過程中組織變干，造成組織邊緣收縮或損壞形成偽影，產生假陽性;(5)3，3'-二氨基聯苯胺(DAB)顯色時間太長，DAB宜現配現用，配制時間比較好在30min以內;(6)由于胞漿里含有較多的蛋白質，因此間質和胞漿中出現很多非特異性的染色，如內源性酶血紅蛋白、肌紅蛋白等造成的著色，可以通過血清封閉解決;乳腺cancer組織中的脂肪細胞、淋巴細胞也會產生非特異性的染色;(7)非特異性抗體吸附常見于壞死組織中，使壞死組織呈較高的背景染色，在免疫組化中應避免選擇壞死組織較多的蠟塊。免疫組化