CASA系統(tǒng)也可用于精子形態(tài)學(xué)評估。CASA系統(tǒng)可用來定量分析精子頭部形態(tài)學(xué)、中段甚至主段的形態(tài),可以把精子頭部和中段分類為正常或者不正常,還可以給出頭部和中段尺度、頭部橢圓率和勻稱性的均數(shù)、標(biāo)準(zhǔn)差和中位數(shù),以及對染色的精子頂體區(qū)進(jìn)行測量[3]。
與人工操作相比,自動化系統(tǒng)更具客觀性,精確度和重復(fù)性的潛力[4]。精確度和重復(fù)性不低于7%[5],這優(yōu)于有經(jīng)驗的技術(shù)人員的手工評估。兩個研究已經(jīng)提示在CASA結(jié)果與生育力之間存在***聯(lián)系。Coetzee等發(fā)現(xiàn)自動分析的正常精子形態(tài)的結(jié)果是預(yù)示體外受精率和妊娠率的有意義指標(biāo)[6]。Garrett等發(fā)現(xiàn)**中能與透明帶結(jié)合的、具有某些頭部形態(tài)特征的精子所占的百分比(Z%),和直線速度(VSL)的精子的百分比,與大樣本的低生育力夫婦的自然妊娠率是有***且**的關(guān)系。Z%和VSL與生育力間的關(guān)系顯示是連續(xù)的,而且沒有顯示臨界值;高于臨界值,妊娠率也不會進(jìn)一步增加[7]。 CASA系統(tǒng)減少了人為因素對檢測結(jié)果的影響,提高了檢測的客觀性和可重復(fù)性?。上海魚精子分析VCL
精子檢測是通過一系列檢測方法來評估男性生育能力的指標(biāo)之一。而檢測方法的選擇直接影響到檢測的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性。目前,常用的檢測方法有手動計數(shù)法、顯微鏡計數(shù)法、電子顯微鏡計數(shù)法、精子運動軌跡分析法等。手動計數(shù)法是通過顯微鏡手動計算精液中精子數(shù)量的方法,該方法簡單易行,但因操作者技能不同,容易出現(xiàn)誤差。顯微鏡計數(shù)法是通過顯微鏡觀察精液中精子數(shù)量的方法,該方法比手動計數(shù)法更加準(zhǔn)確,但需要專業(yè)的技能和經(jīng)驗。電子顯微鏡計數(shù)法是通過電子顯微鏡觀察精液中精子數(shù)量的方法,該方法非常準(zhǔn)確,但需要昂貴的設(shè)備。精子運動軌跡分析法是通過計算機分析精子運動軌跡來判斷精子活力和數(shù)量的方法,該方法不僅準(zhǔn)確性,而且可以直觀地顯示精子的運動狀態(tài),但需要較為復(fù)雜的技術(shù)。除了以上常見的檢測方法,還有一些新興的檢測方法,如流式細(xì)胞術(shù)、全自動分析系統(tǒng)等。這些檢測方法雖然在檢測精子數(shù)量、活力等方面具有一定優(yōu)勢,但由于技術(shù)上的限制和設(shè)備的昂貴,目前還沒有得到廣泛應(yīng)用。在選擇檢測方法時,需要考慮檢測的目的、檢測的準(zhǔn)確性和結(jié)果的可靠性等因素。同時,需要選擇正規(guī)的醫(yī)療機構(gòu)進(jìn)行檢測,避免因設(shè)備不足或技術(shù)不過關(guān)等因素導(dǎo)致檢測結(jié)果出現(xiàn)誤差。美國山羊精子分析DAP在男科和輔助生殖技術(shù)領(lǐng)域,精子質(zhì)量的評估是診斷和處理的重要環(huán)節(jié)。
通過比較進(jìn)行質(zhì)量評估
1.室內(nèi)比較是采用同一個標(biāo)本在同一參數(shù)下?經(jīng)CASA多次測定后?應(yīng)用適當(dāng)?shù)慕y(tǒng)計學(xué)方法對測得數(shù)值進(jìn)行比較。在男科實驗室中對CASA系統(tǒng)的質(zhì)量控制通常使用影像磁帶或完全相同的凍存**標(biāo)本進(jìn)行日間比較。當(dāng)室內(nèi)比較作為結(jié)果質(zhì)量的一種評估時?計算機中數(shù)值的在線獲得是極具優(yōu)勢的。
2.室間比較要求標(biāo)本向其他幾個實驗室運送文獻(xiàn)中的一些報道闡述了該方面的經(jīng)驗但是運動精子是不能在不受限制的條件下運輸?shù)膶⑵渲糜谝旱羞\送需進(jìn)一步考慮更多的因素(解凍技術(shù)、標(biāo)本的處理等)這些因素會影響活動力參數(shù);到目前為止室間比較的研究還未見滿意報道;Jorgensen等進(jìn)行了研究嘗試克服實驗室間運送解凍標(biāo)本的困難其研究方式是:邀請四個實驗室的實驗人員攜帶各自的儀器到同一個地點以各自通常采用的實驗方法進(jìn)行精子評估但未見明確的結(jié)論。3.對于精子活力測定CASA系統(tǒng)的測定與直觀評估的比較有文獻(xiàn)進(jìn)行了報道但結(jié)果并不相同。認(rèn)為直觀評估揭示標(biāo)準(zhǔn)數(shù)值且其差異是由CASA系統(tǒng)的錯誤引起的該觀點是不正確的;無論從理論上還是實踐中CASA數(shù)值比直觀評估所獲得的數(shù)值更接近于真值;對直線前進(jìn)的精子比例而言這一點是非常正確的。
醫(yī)生處置質(zhì)量是指診斷質(zhì)量?是以當(dāng)今醫(yī)學(xué)科學(xué)知識、技術(shù)為基礎(chǔ)依據(jù)癥狀來完成的。CASA系統(tǒng)可以為醫(yī)生提供優(yōu)于傳統(tǒng)精子分析的手段和快速準(zhǔn)確的分析結(jié)果[5]。CASA在醫(yī)生處置質(zhì)量方面的特點在于:①當(dāng)CASA系統(tǒng)的參數(shù)設(shè)定和樣品的處理方式(溫度、稀釋法、緩沖液)確定時?通過個體內(nèi)和個體間的比較?CASA的精子活力重復(fù)性明顯好于直觀評估[6]。②實驗室數(shù)據(jù)資料是質(zhì)量的一部分?CASA系統(tǒng)所有數(shù)據(jù)都是直接在線獲得的?因此明顯優(yōu)于其他方法[6]?記錄傳遞到數(shù)據(jù)庫的過程無錯誤發(fā)生?可清楚準(zhǔn)確地打印出結(jié)果。所有的數(shù)據(jù)可直接轉(zhuǎn)換到數(shù)據(jù)庫、能夠?qū)?**前和***后測定的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)比較[9]、質(zhì)量控制數(shù)據(jù)的采集與保存、每天的標(biāo)本測試記錄以及許多其他報告等等?如此大量數(shù)據(jù)的處理只有在計算機中才能完成。但是CASA系統(tǒng)的參數(shù)設(shè)定也許限制了其質(zhì)量?特別是在精子形態(tài)學(xué)檢查中?通過CASA系統(tǒng)對精子形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行分析[7]?這些特征(細(xì)胞大小、形狀、光學(xué)密度、尾的存在以及其它)可由操作者選擇?這樣就會引起同一標(biāo)本在不同實驗室或不同分析者測得的結(jié)果一致性較差[8]。就形態(tài)學(xué)分析而言?傳統(tǒng)方法的可變性遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于CASA分析。HAMILTON THORNE精子分析儀可分析參數(shù),鞭打頻率(BCF)?:精子曲線路徑跨越其平均路徑的平均頻率。
精子計數(shù)是在顯微鏡下計算一次排出的精液中精子的數(shù)量將精子計數(shù)值乘以精液量就可得出一次**的量。
精液液化后將樣本按一定比例稀釋和固定后,滴于血細(xì)胞計數(shù)板上,在顯微鏡下計數(shù)紅細(xì)胞計數(shù)區(qū)內(nèi)的所有精子數(shù)并換算為每m1內(nèi)所含精子數(shù)。此外還可用電子細(xì)胞計數(shù)儀經(jīng)調(diào)整閾值設(shè)置后計數(shù)精子數(shù)量。
將已經(jīng)液化的精液標(biāo)本均勻混合,用白細(xì)胞計數(shù)吸管吸精液至0.5刻度,再吸稀釋液至11刻度,振蕩三分鐘,然后置于血球計數(shù)板內(nèi),計數(shù)二大格(每格面積1平方毫米)之精子數(shù),在尾數(shù)后加5個“0”即得每毫升精液內(nèi)精子數(shù)。例如計數(shù)為1280個,則每毫升精子應(yīng)為128,000,000。精液稀釋液之配制:重碳酸鈉5克、福爾馬林1毫升、蒸餾水加至100毫升。稀釋液內(nèi)重碳酸鈉有消化粘液的作用,福爾馬林有使精子制動的作用。如精液之稠度過高而不易吸取時,可以精液1毫升混勻于稀釋液19毫升內(nèi),稀釋后進(jìn)行計數(shù)。如精子的數(shù)目極少,亦可改為稀釋10倍計數(shù)。每次排精75%的精子是從附睪尾部所貯存的,還有25%是由輸精管道的其他部分來的,因此單憑一次排精的精子計數(shù)來衡量睪丸生精機能是不***的。只有在排精后間隔4-5天以后多次精液檢查,才能比較正確地從這些精子計數(shù)來反映睪丸的生精機能。 精子分析系統(tǒng)較傳統(tǒng)的分析法比較,具有速度快、量比性好、準(zhǔn)確性高、為臨床和科研提供客觀的檢測依據(jù)。美國慢速運動精子分析ALH
全自動精子分析儀極大提高臨床檢驗水平,廣泛應(yīng)用于泌尿科,男性科以及計劃生育、優(yōu)生優(yōu)育研究等。上海魚精子分析VCL
前沿性檢查:目前不作為生育力低下男性初步評估的常規(guī)方法。這一部分包括了非常專業(yè)化的、主要用于研究的方法和其他新興檢測技術(shù)。有研究認(rèn)為,氧化應(yīng)激可能是影響人類精子功能和妊娠結(jié)局的重要因素;新的證據(jù)也表明了精子DNA完整性和染色質(zhì)組裝與生育力的關(guān)系。前沿性檢查一節(jié)中詳細(xì)介紹了精子氧化應(yīng)激和活性氧實驗、精子染色質(zhì)檢測(苯胺藍(lán)和色霉素A3染色)的具體實驗操作及討論。手冊重寫了計算機輔助精子分析(CASA)部分,強調(diào)了CASA對于檢測精子濃度的局限性與質(zhì)控要求,增加了CASA檢測精子超活化運動的內(nèi)容。對精子跨膜離子流和轉(zhuǎn)運的功能分析,可更好地了解男性不育因素和男性生殖***疾病。為此,手冊新增了檢測精子跨膜離子流和轉(zhuǎn)運的內(nèi)容。上海魚精子分析VCL