免疫組化技術有哪些應用？

定位和定性是免疫組化比較大的優勢。相比于其他蛋白檢測方法，免疫組化具有定位較直接準確、定性靈敏度高，是定位檢測分析優先方法，尤其對于有些因子的轉位研究十分有用。免疫組織化學的臨床應用主要包括以下幾方面：惡性**的診斷與鑒別定性；確定轉移性惡性**的原發部位；對某類**進行進一步的病理分型；軟組織**診斷；為臨床提供治療方案的選擇；近年來，隨著免疫組織化學技術的發展和各種特異性抗體的出現，使許多疑難**得到了明確診斷。免疫組化在**診斷和鑒別診斷中的實用價值受到了普遍的認可，其在低分化或未分化**的鑒別診斷時，準確率可達50%-75%。

免疫組化失敗的原因？湖北細胞免疫組化多少錢

免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色？ 

（1）縮短一抗/二抗孵育時間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。

（2）一抗用多克隆抗體易出現非特異性著色，建議試用單克隆抗體看看。

（3）內源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高（含血細胞多的組織），需要通過延長滅活時間和增加滅活劑濃度來降低背景染色； 

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（4）非特異性組分與抗體結合，這需要通過延長二抗來源的動物免疫血清封閉時間和適當增加濃度來加強封閉效果； 

（5）縮短DAB孵育時間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等； 

（6）適當增加PBS沖洗次數和浸洗時間，在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要； 

（7）防止標本染色過程中出現干片，這容易增強非特異性著色。 四川免疫組化英瀚斯生物免疫組化，高效高質量出結果。

免疫組化的質量控制免疫組化的質量控制是確保實驗結果可靠性和重復性的關鍵步驟。質量控制包括實驗前的抗體驗證、實驗中的陽性對照和陰性對照，以及實驗后的結果評估。抗體驗證是通過Western blot或免疫熒光等方法驗證抗體的特異性和靈敏度。陽性對照是使用已知表達目標蛋白的組織或細胞，確保實驗系統的有效性。陰性對照是使用不表達目標蛋白的組織或細胞，排除非特異性結合。結果評估是通過圖像分析軟件對顯色結果進行定量評估，確保實驗結果的可靠性。

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1、石蠟切片置于65℃烘箱中烘片2h，脫蠟至水，用PBS沖洗三次，每次5min。

2、切片置于EDTA緩沖液中微波修復，中火至沸后斷電，間隔10min低火至沸。

3、自然冷卻后PBS洗3次，每次5min。4、切片放入3%過氧化氫溶液，室溫下孵育10min，以阻斷內源性過氧化物酶。

5、PBS洗3次，每次5min，甩干后5%BSA封閉20min（封閉電荷）。

6、去除BSA液，每張切片加入50μl稀釋的一抗覆蓋組織，4℃過夜。

7、PBS洗3次，每次5min。

8、去除PBS液，每張切片加50μl-100μl相應種屬的二抗，4℃孵育50min。

9、PBS洗3次，每次5min。

10、去除PBS液，每張切片加50-100μl新鮮配制DAB溶液，顯微鏡控制顯色。

11、顯色完全后，蒸餾水或自來水沖洗，蘇木素復染，1%鹽酸酒精分化（1s），自來水沖洗，氨水返藍，流水沖洗。

12、切片經過梯度酒精（70-100%）10min一個梯度，脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固。 關于免疫組化，你想知道的都在這里！

免疫組化的顯色系統

免疫組化的顯色系統是將抗原-抗體反應轉化為可見信號的關鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統有DAB（3,3'-二氨基聯苯胺）和AEC（3-氨基-9-乙基咔唑）。DAB顯色產生棕色沉淀，適用于光學顯微鏡觀察。AEC顯色產生紅色沉淀，適用于光學顯微鏡觀察，但不適合長期保存。此外，還有熒光顯色系統，如FITC（異硫氰酸熒光素）和TRITC（四甲基羅丹明異硫氰酸酯），適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統需要考慮實驗目的和檢測設備。 免疫組化的樣本保存要求是什么？四川免疫組化

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做免疫組化時如何選擇一抗？

1、單克隆和多克隆抗體的選擇。由一種克隆產生的特異性抗體叫做單克隆抗體。單克隆抗體能目標明確地與單一的特異抗原決定簇結合，就像導彈精確地命中目標一樣。另一方面，即使是同一個抗原決定簇，在機體內也可以由好幾種克隆來產生抗體，形成好幾種單克隆抗體混雜物，稱為多克隆抗體。在抗原抗體反應中，一般單克隆抗體特異性強，但親和力相對小，檢測抗原靈敏度相對就低；而多克隆抗體特異性稍弱，但抗體的親和力強，靈敏度高，但易出現非特異性染色（可以通過封閉等避免）。

2、應用范圍的選擇。有的一抗只能用于Westernblotting，或免疫組化、免疫熒光、免疫沉淀等；甚至標明石蠟切片或冰凍切片。

3、種屬反應性的選擇（speciesreactivity）。這一點很重要，表明這種抗體可能存在種屬差別，且這種抗體適合檢測哪種種屬動物體內的抗原。

4、種屬來源，一般兔來源的多是多克隆抗體；而小鼠來源的多是單克隆抗體，但也有另外。根據此來源來選擇相應的二抗。

5、生產廠家的選擇。

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