HE染色分化作用:染色后,用某些特定的溶液將組織過多結(jié)合的染色劑脫去,這個過程稱為分化作用,所用的溶液稱為分化液。在HE染色中用0.5%鹽酸乙醇作為分化液,因酸能破壞蘇木精的醌型結(jié)構(gòu),使組織與色素分離而褪色。經(jīng)蘇木精染色后,必須用0.5%鹽酸乙醇分化,使細(xì)胞核過多結(jié)合的蘇木精染料和細(xì)胞漿吸附的蘇木精染料脫去,在進行伊紅染色,才能保證細(xì)胞核與細(xì)胞漿染色的分明。因此,在HE染色中分化是極為關(guān)鍵的一步。返藍(lán)作用:分化之后,蘇木精在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),呈紅色,在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),呈藍(lán)色。組織切片經(jīng)0.5%鹽酸乙醇分化后呈紅色或粉紅色,故分化之后,立即用水出去組織切片上的酸而終止分化,再用弱堿性水(0.2%氨水)使蘇木精染上的細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色,這個過程稱為返藍(lán)作用或藍(lán)化作用。另外用自來水浸洗也可使細(xì)胞核返藍(lán),但所需時間較長。HE染色 ,石蠟切片技術(shù)里常用的染色法之一。河南推薦的HE染色
HE染色不管怎么操作,始終無法染色或淡染答:這種情況一般因為組織固定時采用了酸性甲醛;或者組織在甲醛中浸泡時間太長;或者久置的甲醛變性分解為甲酸。補救:防患于未然,要么使用新鮮的中性甲醛固定,要么在存放的甲醛中加一點碳酸鈉中和甲酸。對于已經(jīng)固定的組織可考慮再次固定;對于已經(jīng)制出的片子,染色前采用5%重鉻酸鉀溶液浸泡半小時以上,然后自來水漂洗5min,可改善染色。也可以將切片放入3%硫酸鐵銨溶液中,補充染色媒介,增強蘇木素與組織的親和力(蘇木素染色必須要媒介才能染上,單純的蘇木素與組織的親和力很弱)。廣東質(zhì)量好的HE染色多少錢HE染色,一站式實驗外包服務(wù)平臺。
HE染色觀察肝臟HE染色切片,首先要在顯微鏡下找到肝臟的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)——肝小葉。顯微鏡首先調(diào)4倍物鏡,調(diào)準(zhǔn)焦螺旋至視野清晰,可以看到肝小葉結(jié)構(gòu)。人的肝小葉之間結(jié)締組織少,小葉分隔不明顯,但動物如豬或小鼠,其肝小葉分界非常明顯。肝小葉**有**靜脈,在橫切片上顯示為空洞。肝小葉之間為將物鏡調(diào)制10倍或20倍,就可以清楚地看到肝小葉結(jié)構(gòu)。肝細(xì)胞以**靜脈為中心向周圍放射狀排列,稱為肝板。一般在20倍物鏡下可以清晰看到肝細(xì)胞。20倍物鏡下,肝細(xì)胞內(nèi)染色為藍(lán)色的是細(xì)胞核,細(xì)胞核大而圓,居中,異染色質(zhì)少而著色淺,能清晰看到核仁。肝細(xì)胞胞質(zhì)豐富,多成嗜酸性,當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)合成旺盛時,胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)散在的嗜堿性物質(zhì)。肝細(xì)胞內(nèi)有豐富的細(xì)胞器比如溶酶體、高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng),等等,但是在光鏡下是無法看到的,需要在電鏡下才能觀察到。當(dāng)然,肝小葉內(nèi)除了肝細(xì)胞,還有膽小管、肝血竇、肝巨噬細(xì)胞等組織形態(tài),但是在HE染色時并不容易觀察到。做肝臟HE染色切片主要目的一般都是為了觀察肝細(xì)胞形態(tài)是否完整、胞核有無增大、肝小葉形態(tài)是否完整,以檢測藥物等刺激因素對肝臟的損傷作用。
HE染色反藍(lán)的原理:蘇木素染液,細(xì)胞核內(nèi)的染色質(zhì)主要是去氧核糖核酸(DNA),DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木素精堿性染料以離子或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。 分化:蘇木素染色之后,用水洗去未結(jié)合在細(xì)胞上的染液,但是在細(xì)胞核中結(jié)合過多的染料和細(xì)胞漿中吸附的染料必須用分化液1%鹽酸酒精脫去,才能保證細(xì)胞核和細(xì)胞漿染色的分明,把這個過程稱為染色的分化作用。因酸能破壞蘇木素的醌型結(jié)構(gòu),使色素與組織解離,分化不可過度。藍(lán)化:分化之后蘇木素在酸性條件下處于紅色離子狀態(tài),在堿性條件下處于藍(lán)色離子狀態(tài),而呈藍(lán)色,所以分化之后用水洗去酸而中止分化,再用弱堿性水使蘇木精染上的細(xì)胞核變呈藍(lán)色,稱藍(lán)化作用,一般多用自來水浸洗即可變藍(lán),也可用溫水(50度溫水比較好)變藍(lán)。HE染色切片知識以及如何做出漂亮的切片。
HE染色細(xì)胞漿染色原理:細(xì)胞漿內(nèi)主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物、細(xì)胞漿的染色與pH值有密切關(guān)系,當(dāng)pH調(diào)到蛋白質(zhì)等電點4.7-5.0時,胞漿對外不顯電性,此時酸或堿性染料不易染色。當(dāng)pH調(diào)到6.7-6.8時,大于蛋白質(zhì)的等電點pH值,表現(xiàn)酸性電離,而帶負(fù)電荷的陰離子,可被帶正電荷的染料染色,現(xiàn)時胞核也被染色,核和胞漿難以區(qū)分。因此必須把pH調(diào)至胞漿等電點以下,在染液中加入醋酸使胞漿帶正電荷(陽離子),就可被帶負(fù)電荷(陰離子)的染料染色。伊紅Y是一種化學(xué)合成的酸性染料,在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與蛋白質(zhì)的氨基正電荷(陽離子)結(jié)合而使細(xì)胞漿染色,細(xì)胞漿、紅細(xì)胞、肌肉、結(jié)締組織,嗜伊紅顆料等被***成不同程度的紅色或粉紅色,與藍(lán)色的細(xì)胞核形成鮮明的對比。HE染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。吉林性價比高的HE染色
HE染色結(jié)果如何分析和讀片?河南推薦的HE染色
HE染色細(xì)胞質(zhì)過染分析及應(yīng)對原因:(1)伊紅染色液濃度太高,特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在;(2)切片在伊紅染色時間過長;(3)切片在伊紅染色后經(jīng)乙醇脫水步驟時過的太快,而使乙醇分化伊紅的作用不能產(chǎn)生。對策:適當(dāng)稀釋伊紅染色液,減少伊紅染色時間,或者使切片在乙醇脫水等步驟時,停留時間相對均勻。同樣,也要檢查切片的厚度是否合適。切片中出現(xiàn)藍(lán)黑色沉淀物分析及應(yīng)對原因:蘇木精染色液中的金屬膜,黏附在玻片上。對策:每天染色前仔細(xì)過濾蘇木精染色液,或建議使用半氧化蘇木精染色液,如Gill蘇木精染色液,可以避免過多的金屬膜產(chǎn)生。河南推薦的HE染色