HE染色構成組織內蛋白質的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細胞內的酸性物質如細胞核的染色質、腺細胞和神經細胞內的粗面內質網及透明軟骨基質等均被堿性染料染色,這些物質稱為嗜堿性。而細胞質中的其它蛋白質如紅細胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質稱為嗜酸型。如果改變染色液的酸堿度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質可變為嗜堿性;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質則可變為嗜酸性。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應。HE染色是常見的病理染色,是比較基礎是病理染色之一。山東質量好的HE染色外包
HE染色全名為蘇木精和伊紅染色方法,是**基本的病理學染色技術。由于組織或細胞的不同成分對蘇木精的親和力不同及染色性質不一樣。經蘇木精染色后,細胞核及鈣鹽粘液等呈藍色,可用鹽酸酒精分化和弱堿性溶液顯藍,如處理適宜,可使細胞核著清楚的深藍色,胞漿等其它成分脫色。再利用胞漿染料伊紅染胞漿,使胞漿的各種不同成分又呈現出深淺不同的粉紅色。故各種組織或細胞成分與病變的一般形態結構特點均可顯示出來。質量好的HE具備條件1.細胞核與細胞漿藍紅相映,鮮艷亮麗;2.胞核鮮明、核膜、核染色質顆粒均清晰可見;3.組織或一般結構特點及假物質成分均能顯示出來。甘肅病理HE染色哪家好HE染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態學比較常用的染色方法。
HE染色主要是為通細胞及胞核形態、大小來區別各種細胞的,并不是直接通過顏色來區分的蘇木精染液為堿性,主要使細胞核內的染色質與胞質內的核糖體著紫藍色;伊紅為酸性染料,主要使細胞質和細胞外基質中的成分著紅色.炎性細胞一類人體內的免疫細胞,包括中性粒細胞、嗜酸粒細胞、單核巨噬細胞、淋巴細胞和漿細胞.淋巴細胞是**容易和其它幾種細胞區分的,細胞小而圓,核漿比很大,核濃染成深藍紫色.漿細胞大小介于淋巴細胞和巨噬/多核/巨細胞之間,胞漿略嗜堿,核偏位,核染色深,高倍鏡下可見核呈車輪狀.多核細胞和巨細胞的概念是不是有點重疊,多核細胞故名思意是有多個核的大型細胞,如朗漢氏巨細胞,常在肺結核的干酪樣壞死灶周圍出現,多個核排成一圈,異物巨細胞也是有許多個核的體積巨大的細胞,這兩種巨細胞胞質都偏酸.巨噬細胞似乎在不同的組織中有不同的名稱.
HE染色樣本組織固定與切片:首先將組織樣本進行常規的石蠟包埋。在模具中加入液態石蠟,將待包埋的組織樣本放入石蠟中,確保組織位置規整。補充少許液態的石蠟后,進行降溫冷凍,使石蠟變為固態達到組織固定的效果,然后使用石蠟切片機進行切片,厚度在4-8um左右。將切完后的組織切片放入載玻片上使用40℃溫水浸泡使組織充分伸展。組織樣本脫蠟:將待測組織樣本切片放于二甲苯中,充分浸泡10min,浸泡完后更換二甲苯繼續浸泡10min,目的是使用二甲苯將切片中的石蠟溶解,這樣可以在進行染液染色的時候,染液可以充分進入組織種,同時,二甲苯還可以起到透明的作用,使切片更容易觀察。HE染色結果如何分析和讀片?
HE染色多聚甲醛保存組織的注意事項:多聚甲醛放置過久其中的醛基可能會被氧化為酸,使溶液pH降低,從而影響染色。不同細胞或組織樣品所需的固定時間有所不同,應當根據細胞或組織的種類以及組織塊的大小來調整固定時間。多聚甲醛雖然作用溫和,但能硬化組織,固定時間過久會導致組織變脆,切片時易碎。因此固定時間通常不宜超過24小時。多聚甲醛可長期存在于固定過的細胞或組織樣品中,固定完成后用適當的洗滌液或水沖洗數小時仍會有殘留,因此后續實驗結果如果受醛基影響,須盡量洗去殘留的多聚甲醛。醛基與抗原蛋白的氨基交聯形成羧甲基,使抗原決定簇的三維構象出現空間障礙。分子間交聯形成的網格結構可能部分或完全掩蓋某些抗原決定簇,使之不能充分暴露,可造成假陰性的染色,影響免疫組化結果。因此,4%多聚甲醛固定的細胞或組織樣品在進行免疫組化檢測時,有時需要對抗原先進行修復,然后才能進行免疫染色等后續操作。HE染色(脫蠟、水化、染色、脫水、封片) - 實驗方法。山東質量好的HE染色外包
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HE染色顯微鏡下見切片內有大量水珠分析以及應對原因:切片經梯度乙醇處理后沒有完全脫水,導致二甲苯透明中性樹膠封固后殘留大量水分。對策:移去蓋玻片,用二甲苯溶解封固劑如中性樹膠。將切片置入新鮮的無水乙醇中,待切片重新脫水完全后,用新二甲苯透明,中性樹膠封固。所有用于脫水和透明的液體,在使用一定時間以后,應即時更換。光鏡下切片某些區域難以聚焦分析以及應對原因:蓋玻片上可能有封固切片的封固劑。對策:移去蓋玻片,重新用干凈的蓋玻片封片山東質量好的HE染色外包