目前幾種常用免疫組化方法簡單介紹

1）免疫熒光方法是**早建立的免疫組織化學技術。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用較廣。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。

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2）免疫酶標方法免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前**常用的技術。本方法與免疫熒光技術相比的主要優點是：定位準確，對比度好，染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，且隨著方法的不斷改進和創新，其特異性和靈敏度都在不斷提高，使用也越來越方便。目前在病理診斷中廣為使用的有ABC法、SP三步法、即用型二步法檢測系統等。

免疫組化的樣本保存要求是什么？四川大鼠免疫組化價格

實驗失敗常見問題分析有哪些：

為什么在顯微鏡下觀察發現所有的切片都成陰性？

答：這種現象主要是由操作不當導致，可能的原因有：1.染色操作不當，致使染色失敗；2.漏加一種抗體或者制備出的抗體沒有活性；3.緩沖液中有疊氮化鈉，抑制了酶的活性；4.復染或脫水劑使用不當等。建議逐一排查，找到原因后重新進行實驗。

在顯微鏡下觀察發現所有的切片都成陽性，這是為什么？答：與上一個問題類似，出現的原因也是試驗操作存在問題，可能的原因有：1.切片在染色過程中抗體過濃，或者干片了；使用的呈色底物溶液已變色或呈色反應時間過長；3.抗體溫育的時間過長等。

在顯微鏡下觀察發現切片的背景很深，這是為什么？答：以下幾方面會導致切片的背景過深：1.蛋白質封閉不夠或所用血清溶血，造成抗體的非特異性反應；2.內源性過氧化酶沒有完全阻斷，顯色過程中過氧化酶與酶底物反應，造成背景；3.底物呈色反應時間過長或呈色反應后漂洗不徹底。 湖北免疫組化推薦臨床樣本檢測，免疫組化，英瀚斯生物專業病理。

免疫組化分類中，免疫熒光方法，英瀚斯生物為您進行介紹。一開始建立的免疫組織化學技術。它利用抗原抗體特異性結合的原理，先將已知抗體標上熒光素，以此作為探針檢查細胞或組織內的相應抗原，在熒光顯微鏡下觀察。當抗原抗體復合物中的熒光素受激發光的照射后即會發出一定波長的熒光，從而可確定組織中某種抗原的定位，進而還可進行定量分析。由于免疫熒光技術特異性強、靈敏度高、快速簡便，所以在臨床病理診斷、檢驗中應用比較廣。

免疫組化分類中免疫酶標方法，英瀚斯生物為您介紹。免疫酶標方法是繼免疫熒光后，于60年代發展起來的技術。基本原理是先以酶標記的抗體與組織或細胞作用，然后加入酶的底物，生成有色的不溶性產物或具有一定電子密度的顆粒，通過光鏡或電鏡，對細胞表面和細胞內的各種抗原成分進行定位研究。免疫酶標技術是目前定位準確、對比度好、染色標本可長期保存，適合于光、電鏡研究等。免疫酶標方法的發展非常迅速，已經衍生出了多種標記方法，目前在病理診斷中廣為使用的當屬***法（過氧化物酶-抗過氧化物酶）、ABC法（卵白素-生物素-過氧化物酶復合物）、SP法（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶）、即用型二步法（聚合物鏈接）等。免疫組化可以看什么？

免疫組化（IHC）利用抗體檢測組織切片中蛋白質和其他抗原的定位。

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抗體-抗原的相互作用通過有色酶底物顯色檢測或熒光染料熒光檢測進行觀察。雖然IHC在定量方面不如蛋白質印跡或ELISA，但是IHC可以提供完整組織中蛋白定位的寶貴信息。蛋白表達譜對病理學家以及作為診斷工具都具有重要意義。

IHC實驗成功的關鍵在于穩定、優化且可重復的染色方案，而該方案應使用高質量的特異性試劑。 免疫組化相關知識匯總。山西細胞免疫組化實驗

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免疫組化應該選擇石蠟切片還是冰凍切片？ 

（1）要求做冰凍切片的不一定能做石蠟切片，這是***我向一老師請教得出的結論。因為作石蠟切片時要高溫烤片，可能會破壞組織的抗原性，如果組織的抗原性較穩定，則可作石蠟切片；但是要求做石蠟切片的，可作冰凍切片。

（2）冰凍切片的優點是能夠較好的保存組織的抗原免疫活性，做免疫組化時不需抗原修復這一步。缺點是細胞內易形成冰晶而破壞細胞結構，可能會使抗原彌散；切片厚度較石蠟的厚，做的片子沒石蠟的漂亮。當你買一抗時，目錄上都寫著做什么樣的切片，如果它寫著只能做冰凍，就不能做石蠟，如寫著兩者都可，那就都能做。

（3）石蠟切片的優點可以保持組織細胞的形態結構，且容易存放在室溫，而冰凍切片比較麻煩，一定要存在-80度的低溫冰箱中，尤其是用來做原位雜交的的切片，為了防止RNA降解，保存一貫很重要。由于石蠟切片可以切到4微米左右，所以原位雜交探針容易滲透到組織中去，容易成功，而且得到的顏色/形態都較冰凍切片好。

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