HE染色標(biāo)本一般是針對石蠟標(biāo)本,脂滴和石蠟都是的有機物, 都具有非極,脂滴應(yīng)該可以溶解石蠟的。 HE染色就是用蘇木精和伊紅對細(xì)胞內(nèi)的核糖體和細(xì)胞質(zhì)染色的方法。 H:Hematoxylin,蘇木精 E:Eosin,伊紅 蘇木精(Hematoxylin,H)是一種堿染料,可將細(xì)胞核和細(xì)胞內(nèi)核糖體染成藍(lán)紫色,被堿染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜堿。 伊紅(,E)是一種酸染料,能將細(xì)胞質(zhì)染成紅色或淡紅色,被酸染料染色的結(jié)構(gòu)具有嗜酸。染色前,須用二甲苯脫去切片中的石蠟,再經(jīng)由高濃度到低濃度酒精,***入蒸餾水,就可染色。南京英瀚斯生物石蠟組織切片的HE染色。陜西推薦的HE染色外包
HE染色脫蠟不凈的原因及驗證方法:1)二甲苯使用過久,含蠟成分太高或脫蠟效果差:可更換二甲苯驗證。2)切片經(jīng)烤片,冷卻后放入二甲苯脫蠟或室溫太低;延長拖拉時間或用熱的切片脫蠟驗證。3)脫蠟時間太短或振蕩太少,幅度太??;可延長脫蠟時間或以多振蕩來驗證。4)洗滌二甲苯用的乙醇使用時間過久,導(dǎo)致乙醇中二甲苯含量過高,二甲苯殘留在切片上(由于二甲苯與水不相溶,切片上有二甲苯的地方,蘇木精就沒有辦法滲透進(jìn)去,在切片染色完成后留下了點狀的不著**域):更換各道乙醇驗證。5)二甲苯、乙醇質(zhì)量不佳(偶有試劑瓶內(nèi)裝的試劑與試劑名不相符):換批號驗證。6)更換脫蠟液體時試劑拿錯:需重新配置驗證。7)更換脫蠟液體時試劑次序放錯:需重新配置驗證。8)烤片時間短,切片上水分沒有烤干,也會導(dǎo)致著色不勻,出現(xiàn)點狀發(fā)白區(qū)域。陜西推薦的HE染色外包HE染色取材和樣本保存方式。
HE染色原理1、細(xì)胞核染色的原理:蘇木精為堿性天然染料,可使細(xì)胞核著色。細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)的成分主要是DNA,在DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)中,兩條核苷酸鏈上的磷酸基向外,使DNA雙螺旋的外側(cè)帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性燃料以離子鍵或氫鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。2、細(xì)胞漿染色的原理:伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料,在一定條件下可使細(xì)胞漿著色。細(xì)胞漿的主要成分是蛋白質(zhì),為兩性化合物,細(xì)胞漿的染色與染液的pH在胞漿蛋白質(zhì)等電點(4.7—5.0)以下時,胞漿蛋白質(zhì)以堿式電離,則細(xì)胞漿帶正電荷,就可被帶負(fù)電荷的酸性染料染色。伊紅在水中離解成帶負(fù)電荷的陰離子,與胞漿蛋白質(zhì)帶正電荷的陽離子結(jié)合,使細(xì)胞漿著色,呈現(xiàn)紅色。
HE染色細(xì)胞質(zhì)過染分析及應(yīng)對原因:(1)伊紅染色液濃度太高,特別是焰紅燃料、四溴四氯熒光素鈉的存在;(2)切片在伊紅染色時間過長;(3)切片在伊紅染色后經(jīng)乙醇脫水步驟時過的太快,而使乙醇分化伊紅的作用不能產(chǎn)生。對策:適當(dāng)稀釋伊紅染色液,減少伊紅染色時間,或者使切片在乙醇脫水等步驟時,停留時間相對均勻。同樣,也要檢查切片的厚度是否合適。切片中出現(xiàn)藍(lán)黑色沉淀物分析及應(yīng)對原因:蘇木精染色液中的金屬膜,黏附在玻片上。對策:每天染色前仔細(xì)過濾蘇木精染色液,或建議使用半氧化蘇木精染色液,如Gill蘇木精染色液,可以避免過多的金屬膜產(chǎn)生。南京英瀚斯,專業(yè)的技術(shù)提供專業(yè)的HE染色服務(wù)。
HE染色原理:易于被堿性或酸性染料著色的性質(zhì)稱為嗜堿性(basophilia)和嗜酸性(acidophilia);而對堿性染料和酸性染料親和力都比較弱的現(xiàn)象稱為中性(neutrophilia)。構(gòu)成組織內(nèi)蛋白質(zhì)的氨基酸的種類很多,它們有不同的等電點。在普通染色法中,染色液的酸堿度為pH6左右,細(xì)胞內(nèi)的酸性物質(zhì)如細(xì)胞核的染色質(zhì)、腺細(xì)胞和神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)的粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)及透明軟骨基質(zhì)等均被堿性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜堿性。而細(xì)胞質(zhì)中的其它蛋白質(zhì)如紅細(xì)胞中的血紅蛋白、嗜酸粒細(xì)胞的顆粒及膠原纖維和肌纖維等被酸性染料染色,這些物質(zhì)稱為嗜酸型。如果改變?nèi)旧旱乃釅A度,pH值升高時,則原來被酸性染料染色的物質(zhì)可變?yōu)槭葔A性;pH值降低時,原來被堿性染料染色的物質(zhì)則可變?yōu)槭人嵝?。所以說染色液的pH值可以影響染色的反應(yīng)。脫氧核糖核酸(DNA)兩條鏈上的磷酸基向外,帶負(fù)電荷,呈酸性,很容易與帶正電荷的蘇木精堿性染料以離子鍵結(jié)合而被染色。蘇木精在堿性溶液中呈藍(lán)色,所以細(xì)胞核被染成藍(lán)色。什么是HE染色,HE染色實驗的目的。陜西推薦的HE染色外包
HE染色,即是蘇木精-伊紅染色法,是形態(tài)學(xué)比較常用的染色方法。陜西推薦的HE染色外包
HE染色主要是為通細(xì)胞及胞核形態(tài)、大小來區(qū)別各種細(xì)胞的,并不是直接通過顏色來區(qū)分的,HE染色細(xì)胞壞死的三種改變:(1)細(xì)胞核的改變:這是細(xì)胞壞死的主要形態(tài)標(biāo)志,表現(xiàn)為核濃縮,核碎裂,核溶解。(2)細(xì)胞質(zhì)的改變:由于胞質(zhì)發(fā)生凝固或溶解,HE染色呈深紅色顆粒狀,如肝細(xì)胞壞死出現(xiàn)的嗜酸性小體醫(yī)學(xué)|教育網(wǎng)搜集整理。(3)間質(zhì)的改變:由于各種溶解酶的作用,基質(zhì)崩解、膠原纖維腫脹、斷裂或液化,與壞死的細(xì)胞融合成一片,呈紅染的顆粒狀無結(jié)構(gòu)物質(zhì)。南京英瀚斯生物陜西推薦的HE染色外包