核酸內切酶VIII(EndonucleaseVIII)和核酸內切酶III(EndonucleaseIII)都是DNA修復酶,但它們之間存在一些關鍵的區別:1.**活性類型**:-**核酸內切酶VIII**:具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。N-糖基化酶活性可以釋放受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,產生一個脫嘌呤(Apurinic,AP)位點;AP裂解酶活性可以切割AP位點的3'和5'端,產生一個具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。-**核酸內切酶III**:主要具有β裂解酶(β-lyase)活性,能夠切割DNA磷二酯骨架在AP位點處,但不具備δ裂解酶(δ-lyase)活性。2.**識別和切除的受損堿基**:-**核酸內切酶VIII**:可以識別并切除包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲在內的多種受損堿基。-**核酸內切酶III**:主要識別和切除氧化性損傷的嘌呤堿基,如8-氧鳥嘌呤。3.**裂解酶活性**:-**核酸內切酶VIII**:具有β和δ裂解酶活性,而**核酸內切酶III**具有β裂解酶活性。這些區別決定了它們在DNA損傷修復中的作用和應用范圍。
BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶結構域,因此它具有鏈置換活性,可以用于重組酶聚合酶擴增(RPA)等恒溫擴增技術。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關鍵特性和應用:1.**活性定義**:在37°C條件下,30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質所需的酶量定義為1個活性單位(U)。2.**熱失活條件**:75°C,20分鐘。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲存條件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事項**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對的突出末端,因而不適用于生成平齊末端。-25°C時BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍。6.**應用**:-隨機引物法標記。-cDNA第二條鏈的合成。-單個dA的加尾。-鏈置換的DNA合成。Recombinant Human Tenascin Protein,His TagCas12a還可以高效地在一些重要的工業鏈霉菌菌株中產生編輯,這些菌株由于毒性而不能使用SpCas9進行編輯。
T7EndonucleaseI(T7EI)是一種特殊的DNA內切酶,具有以下特點:1.**識別錯配DNA**:T7EI能夠識別并切割不完全配對的DNA、十字型結構DNA、Holliday結構或交叉DNA以及異源雙鏈DNA。2.**切割位點**:T7EI切割錯配位點5'端的、第二或第三個磷酸二酯鍵。3.**靈敏度**:T7EI對錯配DNA的識別非常靈敏,能夠檢測并切割單堿基和多堿基的錯配。4.**應用**:T7EI常用于CRISPR/Cas9等基因編輯技術導致的基因突變的鑒定。它通過識別錯配DNA來幫助鑒定基因編輯是否成功以及是否有非目標效應。5.**直接電泳檢測**:T7EI的產物可以直接通過電泳進行檢測,這使得它在實驗操作中更為方便。6.**來源**:T7EI來源于大腸桿菌菌株,是一種麥芽糖結合蛋白(MBP)和T7核酸內切酶I(T7EI)的融合蛋白。7.**成本效益**:盡管T7EI在商業上使用時成本較高,但它在大規模樣本測試中,尤其是在基因突變鑒定方面,提供了一種有效的篩選方法。8.**特殊注意事項**:T7EI能夠識別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導致的錯配DNA,但不能識別1bp的插入、缺失或突變。這些特點使得T7EndonucleaseI成為基因突變鑒定中一個非常有用的工具,尤其是在CRISPR/Cas9等基因編輯技術的應用中。
BstDNA聚合酶和TaqDNA聚合酶在分子生物學實驗中都是常用的酶,但它們之間存在一些關鍵的不同點:1.**來源和熱穩定性**:-**TaqDNA聚合酶**來源于嗜熱菌Thermusaquaticus,具有很好的耐熱性,能夠承受PCR的熱變性步驟。-**BstDNA聚合酶**來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillusstearothermophilus),同樣具有較高的熱穩定性,適用于等溫擴增,如LAMP技術,無需PCR熱循環。2.**酶活性**:-**TaqDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和5'-3'外切酶活性,但沒有3'-5'外切酶活性。這意味著它在DNA合成過程中可以校正一些錯誤,但保真性相對較低。-**BstDNA聚合酶**具有5'-3'聚合酶活性和強鏈置換活性,但缺乏5'-3'外切酶活性。這使得它在等溫擴增中更為有效,尤其是在需要高保真度和快速擴增的應用中。3.**應用領域**:-**TaqDNA聚合酶**主要用于PCR技術,適用于各種DNA片段的擴增,包括復雜模板和長片段的擴增。-**BstDNA聚合酶**特別適用于等溫擴增技術,如LAMP,這些技術不需要溫度循環,適用于快速、低成本的DNA擴增。4.**擴增速度和效率**:-**BstDNA聚合酶**在等溫擴增中顯示出比傳統TaqDNA聚合酶更快的擴增速度和更高的產量,尤其是在優化的LAMP反應中。
qPCR(定量聚合酶鏈式反應)檢測結果的準確性可能受到多種因素的影響,以下是一些關鍵因素:1.**引物和探針設計**:引物和探針的設計質量對qPCR的成功至關重要。不合適的引物設計可能導致低特異性或效率低的PCR反應。引物的選擇應考慮引物的長度、Tm值(解離溫度)和GC含量,以確保其適用于特定的核酸模板。2.**模板質量和純度**:模板的質量和純度直接影響qPCR的結果。污染或降解的模板可能導致偏差或虛假陽性結果。使用質量高、純度高的DNA或RNA樣本是確保準確和可靠的qPCR結果的關鍵。3.**反應條件和緩沖液**:PCR反應條件,包括溫度、離子濃度和緩沖液成分,必須嚴格控制。溫度梯度、離子濃度的變化或緩沖液成分的誤配可能會影響PCR效率。4.**反應容器和耗材**:反應管、微孔板、封閉膜等反應容器和耗材的質量也會影響qPCR結果。低質量的材料可能導致樣本丟失或反應失效。5.**標準曲線和校準**:標準曲線的準備和校準非常重要。不正確的標準曲線可能導致定量結果的不準確性。確保標準曲線中包含適當的對照樣品,并使用線性擬合來生成準確的定量數據。6.**環境條件**:實驗室溫度、濕度和空氣質量都可以影響qPCR實驗的結果。不穩定的環境條件可能導致實驗結果的不穩定性。UBE2L3在調節NF-κB信號通路中的作用可能對免疫反應和炎癥過程至關重要。Recombinant Human AXL Protein,His Tag
FnCas12a系統的脫靶效應較低,這對于減少非目標效應和提高物質的安全性至關重要。Recombinant Mouse TNFRSF12A/TWEAKR Protein,hFc Tag
Cre重組酶在基因編輯中的操作主要涉及以下幾個步驟:1.**識別與結合**:-Cre重組酶首先識別并分別結合兩個LoxP序列的兩個反向重復序列,形成一個二聚體。2.**四聚體形成**:-兩個二聚體互相靠近,形成由四個Cre分子與兩個LoxP位點結合形成的四聚體復合物。3.**DNA切割與交換**:-Cre重組酶在每個LoxP位點的間隔序列中引導單鏈切割,產生帶有3’端羥基的斷裂。每個LoxP位點的兩個單鏈分別被切割。切割產生的自由3’端與對側的3’端進行交換和重連,形成Holliday交叉結構。4.**分子重組與解旋**:-Holliday交叉結構通過Cre酶的作用被解旋并重組,形成新的重組產物。這個過程導致兩個LoxP位點之間的DNA序列被刪除、反轉或易位,具體效果取決于LoxP序列的排列方式(方向和位置)。5.**條件性基因編輯**:-通過建立特異性Cre小鼠,該小鼠中的Cre重組酶由特定啟動子驅動,可在特定細胞或組織或全身表達Cre重組酶。與帶有Lox位點的Flox小鼠雜交,子代中可以獲得既帶有Cre又帶有Flox基因的小鼠,實現條件性基因打靶(表達或敲除靶基因)。Recombinant Mouse TNFRSF12A/TWEAKR Protein,hFc Tag
PAR-1 agonist peptide
Recombinant Mouse MXRA8 Protein
Recombinant Human PKC iota Protein
Recombinant Mouse CD21 Protein
Recombinant Mouse G-CSF
Recombinant Human NKG2C/CD159c Protein
Recombinant Cynomolgus Siglec-3/CD33 Protein
Recombinant Human GM-CSF R alpha Protein
rTEV Protease重組煙草蝕紋病毒蛋白酶
Recombinant Cynomolgus TPBG/5T4 Protein