使用PreScissionProtease進行蛋白質切割時，為保證高純度和高活性，需要考慮以下關鍵因素：1.**特異性切割位點**：確保融合蛋白中包含PreScissionProtease特異性識別的序列，以實現精確切割。2.**酶與底物的比例**：適當比例的酶量對于高效切割至關重要，過多或過少的酶都可能影響切割效率和純度。3.**反應條件**：包括溫度、pH和反應時間等，這些條件需要優化以確保酶的活性和選擇性。通常，PreScissionProtease在4°C下進行酶切。4.**緩沖液兼容性**：使用與PreScissionProtease兼容的緩沖液，避免使用可能抑制酶活性的離子或化學物質。5.**蛋白濃度**：確保融合蛋白有足夠的濃度，以提高切割效率和減少樣品損失。6.**酶切后的分離**：切割后，需要有效分離目的蛋白和切割下來的標簽，通常利用親和層析等方法。7.**避免蛋白降解**：在實驗過程中添加蛋白酶抑制劑，以防止蛋白降解酶對目的蛋白的降解。8.**避免蛋白質聚集**：在切割過程中，應避免條件導致蛋白質聚集或沉淀，這可能會影響純度和活性。9.**避免氧化**：在蛋白質處理過程中，添加抗氧化劑如DTT或TCEP，以防止半胱氨酸殘基的氧化。10.**清潔的實驗環境**：確保實驗器材和環境的清潔，避免微生物污染和核酸污染。在這個過程中，E1使用ATP的能量，在自身的活性位點的半胱氨酸殘基與泛素C末端的甘氨酸殘基形成硫酯鍵。Recombinant Human GBA/glucocerebrosidase Protein,His Tag

EndoS糖苷內切酶S在抗體藥物偶聯物（ADCs）研究中的應用主要體現在糖鏈定點偶聯技術上。通過上海藥物所的研究，開發了一種新穎的糖鏈定點ADC制備策略，利用EndoS2這種糖苷內切酶，可以將小分子細胞毒藥物“一步”定點連接到抗體的糖基化位點，實現了糖鏈定點ADC化合物的制備。定點偶聯技術相比傳統的隨機偶聯具有更好的方法指數，能夠提高ADC的均一性和穩定性，是當前ADC領域的研究熱點之一。在抗體的Fc結構域N297位，這是一個保守的糖基化位點，通過在該位點引入細胞物質，可以形成具有優勢的糖鏈定點ADC化合物（glycosite-specificADCs,gsADCs）。此外，EndoS2對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性，能夠高效獲得功能修飾的糖工程抗體，并且可以用于抗體的內吞成像研究及糖鏈延伸等功能化研究。研究人員通過這種“一步”制備策略得到的糖鏈定點ADC化合物，在結構均一性、親水性、體外穩定性以及體外活性方面表現良好，并且在體內瘤抑制活性方面，相比陽性對照ADC化合物，在低載藥量的情況下具有更強的抑制效果。EndoS酶的這些應用，不僅展示了其在簡化ADC制備流程中的潛力，還有助于推動定點ADC藥物的深入發展，為未來的生物藥物開發提供了新的思路和方法。Recombinant Human GBA/glucocerebrosidase Protein,His Tag泛素分子可以通過其內部的賴氨酸殘基與其他泛素分子形成多聚泛素鏈，這一步驟通常由E3酶催化。

PreScissionProtease（PSP）在去除融合蛋白標簽時，對目的蛋白的純度和活性的影響通常是積極的，具體表現在以下幾個方面：1.**小化污染**：由于PSP具有高度的特異性，它在特定的肽鍵處切割，從而減少了非特異性切割可能導致的蛋白質片段，這有助于保持目的蛋白的純度。2.**減少蛋白質修飾**：PSP的特異性切割有助于避免在切割過程中對目的蛋白引入額外的修飾，如磷酸化或糖基化，這些修飾可能會影響蛋白質的活性和穩定性。3.**保持活性**：如果融合蛋白標簽的設計和切割位點選擇得當，PSP切割后的目的蛋白通常能夠保持其原有的生物活性。切割位點通常位于標簽和目的蛋白之間，這樣切割后不會在目的蛋白上留下額外的氨基酸，從而減少了對蛋白質結構和功能的影響。4.**提高純度**：PSP切割后，可以通過親和層析等方法將標簽、PSP以及未切割的融合蛋白分離，從而獲得高純度的目的蛋白。5.**便于后續分析**：去除標簽后的目的蛋白更易于進行后續的質譜分析、晶體學研究或其他生物化學分析，因為去除了可能干擾分析的標簽部分。6.**穩定性**：在某些情況下，融合蛋白的標簽可能有助于穩定目的蛋白的構象，因此在去除標簽后，需要適當處理以維持目的蛋白的穩定性。

在蛋白質糖基化分析中，除了N-糖苷酶F（PNGaseF），還有其他幾種酶也發揮著重要作用，具有各自的優勢：1.**EndoH糖苷內切酶H**：這種酶可以水解高甘露糖型N-連接糖鏈，通常用于區分高甘露糖型和復雜型糖鏈。2.**EndoS糖苷內切酶S**：EndoS能夠從IgG重鏈的殼二糖結構之間切除N-連接糖，有助于分析抗體的糖基化模式。3.**FastPNGaseF**：這是一種經過優化的PNGaseF，能在數分鐘內對抗體、免疫球蛋白、融合蛋白以及其他糖蛋白進行徹底和快速的去糖基化，簡化了實驗流程，同時保持了靈敏度和重復性。4.**O-糖苷酶O-glycosidase**：用于去除O-連接的糖鏈，這對于O-糖基化蛋白質的分析至關重要。5.**三氟甲基磺酸(TFMS)法**：這是一種化學去糖基化方法，可以用于釋放糖鏈，尤其在某些難以使用酶法去除糖鏈的情況下。6.**質譜法**：雖然不是酶，但質譜法是分析糖鏈結構的強大工具，可以結合酶法或化學法釋放的糖鏈進行詳細分析。7.**核磁共振法(NMR)**：NMR技術可以確定糖鏈的構型、連接位置、分支和微觀多樣性，是糖鏈立體化學結構分析的重要方法。這些酶和方法各有優勢，可以根據實驗的具體需求和糖基化類型的不同進行選擇，以獲得比較好的分析結果。

PreScissionProtease（PSP）是一種在蛋白質純化和分析中使用的酶，具有以下特點：1.**特異性識別**：PSP能在低溫（4°C）下特異性識別八肽序列Leu-Glu-Val-Leu-Phe-Gln-Gly-Pro或五肽序列Leu-Phe-Gln-Gly-Pro，并在Gln和Gly之間進行酶切。2.**應用**：PSP常用于去除融合蛋白中的GlutathioneS-transferase(GST)、His等標簽，有助于純化目的蛋白。3.**純度高**：PSP的純度達到95%以上，確保了實驗的準確性和重復性。4.**穩定性好**：PSP在含有50%甘油的儲存緩沖液中，-80℃長期儲存，有效期2年；小量分裝-20℃保存，有效期6個月。5.**酶活定義**：在5℃條件下反應16小時，能夠切割100μg的GST標簽蛋白達90%以上所需的酶量定義為一個活性單位。6.**兼容性強**：PSP的酶切體系中可以兼容1%TritonX-100、Tween-20或NP-40，10mMEDTA和500mMNaCl。7.**注意事項**：某些化合物如100mMZnCl2、4mMAEBSF和100μMChymostatin會抑制PSP的酶活性50%以上。8.**優化酶切效率**：建議進行預實驗摸索實驗濃度，實際操作中，建議酶用量1:25-1:100U/μg融合蛋白。CRISPR-Cas12a（以前稱為Cpf1）是一種類II型V型內切酶，偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復序列鄰近基序。Recombinant Cynomolgus PDGFR beta/CD140b Protein,His Tag

Cas12a不僅具有順式切割活性，還具備獨特的反式切割活性，這使得它能夠無差別地裂解附近的單鏈DNA。Recombinant Human GBA/glucocerebrosidase Protein,His Tag

酵母重組表達的PNGaseF（N-糖苷酶F）是一種用于蛋白質去糖基化實驗的酰胺水解酶，具有以下特點以確保實驗中的活性和穩定性：1.**高效性**：具有高比活性，例如750000U/mL，這有助于快速高效地進行去糖基化反應。2.**穩定性**：在含有50%甘油的儲存緩沖液中，比較好的活性和穩定性可維持長達24個月。3.**使用條件**：可以在原生或變性條件下使用，對于變性條件下的去糖基化，建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**：建議在-15~-25℃保存，有效期1年。5.**酶活定義**：1個酶活力單位指在10μL的反應體系中，37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**：提供了使用說明，包括變性和非變性條件下的蛋白質去糖基化步驟。7.**His標簽**：產品帶有His標簽，便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**：純度達到95%以上，通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應**：有些產品如FastPNGaseF，可以在數分鐘內完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**：產品供科研使用，操作時應穿戴適當的實驗室防護裝備。遵循這些指導原則和產品說明，可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩定性，從而獲得可靠的去糖基化結果。Recombinant Human GBA/glucocerebrosidase Protein,His Tag