參考原理:血液中單個蛋白質分子的檢測有助于識別許多新的診斷性蛋白質標記物。我們報告了一種同時檢測數百至數千個單獨蛋白質分子的方法,該方法能夠檢測到非常低濃度的蛋白質。蛋白質被捕獲在顯微珠上,并用酶標記,每個顯微珠上有一個或零個酶標記的蛋白質。通過將這些顯微珠分離成50飛米的陣列反應室,單個蛋白質可以通過熒光想象檢測到。通過單化這些陣列中的分子,~10-20種酶可以在100μL(~10?19M)中檢測到。單個基于酶標記的分子酶聯免疫吸附試驗(數字ELISA)能夠檢測血清中臨床相關的蛋白質,其濃度(<10?15M)遠低于傳統ELISA3-5。數字ELISA在所有接受防冶性前列腺切除術的患者血清中檢測到前列腺特異性抗原,比較低至14fmol/mL(0.4fmol)。
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微量樣本超多重檢測芯片:亞pg級靈敏度與高通量的協同創新,微量樣本超多重檢測芯片突破傳統技術限制,單通道**多設計21個檢測區,單個芯片并聯8-16個**通道,檢測速度達288-336測試/小時,性能媲美化學發光技術,靈敏度達亞pg級別。其“省樣本、省耗材、省空間”優勢***:5μl微量進樣適配稀缺樣本,21項指標共享一套耗材降低成本,桌面式掃描儀節省實驗室空間。在**普查中,該芯片可同時篩查29種肺*標記物,篩選特異性>80%的組合(如CEA、SA、CA242),提高早期診斷準確性;在炎癥因子檢測中,對IL-1β、IL-6等低豐度細胞因子的檢測線性范圍寬泛,為疾病早期***篩查提供了高效解決方案,尤其適合大規模流行病學調查與個體化醫療中的多因子分析。亞皮克級數字ELISA使用效果芯棄疾芯片可檢測血清中 NfL 等較低豐度神經因子,助力阿爾茨海默癥早期篩查。
抗體篩選芯片的正交驗證能力,抗體篩選芯片支持同一反應體系下不同樣本的交叉反應測試,為抗體的正交驗證提供了高效平臺。在篩選IL-6抗體對時,可同時測試8種捕獲抗體與8種標記抗體的組合,通過陰性質控品與陽性質控品的比值分析,快速排除非特異性配對,篩選出親和力常數(KD)<10??M的高特異性抗體。該能力在復雜樣本(如含有異嗜性抗體的血清)檢測中尤為重要,可提前識別潛在干擾因素,提升診斷試劑盒的臨床適用性。此外,芯片的低密度陣列設計(如3×7排列)便于后續單克隆抗體的克隆化篩選,形成從初步篩選到精細優化的完整技術鏈條,加速抗體藥物與診斷試劑的研發周期。
芯棄疾JX-8B數字ELISA產品是什么?怎么做到單分子技術的低成本實現?參考原理:
分子水平的疾病檢測正在推動早期診斷和治病的新興變革。該領域面臨的一個挑戰是,用于早期診斷的蛋白質生物標志物可能存在于非常低的豐度中。傳統免疫分析技術的檢測下限為飛摩爾范圍(10?13M)。數字免疫分析技術將檢測靈敏度提高了三個數量級,達到了飛摩爾范圍(10?16M)。這一能力有可能在診斷和治病領域開辟新的進展,但這些技術已被限制為不適合高效常規使用的手動程序。我們描述了一種新的實驗室儀器,該儀器能夠完全自動化單分子陣列(Simoa)技術進行數字免疫分析。該儀器具有單分子靈敏度和多重檢測,具有快速周轉時間和每小時處理66個樣本的能力。針對心血管、腫標、傳染病、神經學和炎癥研究中的16種感興趣的蛋白質,開發了單分子和多重數字免疫分析方法。與傳統方法相比,Simoa免疫分析方法的平均靈敏度提高了lELISAwas>1200倍,變異系數為<10%。數字免疫分析在推進人類診斷方面具有潛力,這在兩個臨床領域得到了體現:創傷性腦損傷和傳染病的早期檢測 芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產品,少至可以進行8孔、4孔的靈活檢測。
芯棄疾JX-8B數字ELISA產品每個生物實驗室都用得起的單分子免疫檢測SiMoA通過將單個酶產生的熒光團限制在極小范圍內,從而能夠檢測到非常低濃度的酶標記物體積(~50fL),導致熒光產物分子的局部高濃度。為了在免疫測定中實現這種定位,在第二步中,將珠子加載到一個陣列為離散的微升大小的孔(圖1C)。本研究中使用的2毫米寬陣列有~50,000個孔,孔徑為μm,孔深為μm。加載后的陣列在含有熒光酶底物液滴的情況下,用橡膠密封圈密封。Rissin等人,第3頁將每個微球隔離在飛升反應室中。具有單一酶的微球標記的免疫復合物在50飛升的反應室中產生局部高濃度的熒光產物(圖1D)。通過使用標準顯微鏡光學系統獲取陣列的時間變化熒光圖像,可以區分與單一酶分子相關的微球(“開啟”孔)和不與酶相關的微球(“關閉”孔);補充圖1顯示了“開啟”和“關閉”孔的熒光直方圖。成像陣列可以成千上萬的單個免疫復合物同時檢測。通過測定供試品中的蛋白質濃度來確定計算含有珠子和熒光產物的孔數相對于含有珠子的孔數(圖1D)。使用SiMoA,濃度是因此,我們稱SiMoA應用于檢測單個免疫復合物為數字ELISA。 芯棄疾JX-8B數字ELISA,低成本單分子檢測;生醫實驗室數字ELISA使用效果
使用現有平臺就能做的單分子免疫檢測;芯棄疾產品數字ELISA微量樣本
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參考的其他高靈敏檢測方法: 芯棄疾產品數字ELISA微量樣本
兩種更多測試的模擬分析信號放大技術是免疫PCR和生物條形碼分析。免疫PCR通過將檢測抗體標記為DNA分子,然后使用PCR進行擴增和定量,從而提高靈敏度。生物條形碼分析利用了與DNA“條形碼”標記的抗分析物納米顆粒,這些納米顆粒在與捕獲在金微粒上的分析物結合后,從納米顆粒上脫雜以進行定量。這兩種方法相對于傳統免疫分析法的靈敏度提高了10到100倍,但尚未整合到所需的全自動系統中,也未用于多重分析。為了比較大限度地加速藥物發現、驗證新型生物標志物并將分子水平診斷引入臨床主流,需要一種具有高效率、高質量數據和成本效益的穩健、多重超靈敏蛋白質檢測技術。