培養基的制備原則和要求:培養基是根據各類微生物生長繁殖的需要,用人工方法把多種物質混合而成的營養物。一般用來分離、培養菌類。常用的培養基有基礎培養基、增菌培養基、選擇培養基、鑒別培養基和厭氧培養基。在制備培養基時,應掌握如下原則和要求:(一)培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈,稱取的份量務必準確。(二)培養基的酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。培養基長時間的高溫滅菌會使某些不耐熱的物質破壞,如使糖類物質形成氨基糖、焦糖。四川培養基制備器報價
培養基中血清的質量標準:血清質量高低取決于兩方面因素:一是取材對象,二是取材過程。用于取材的動物應健康無病并且在指定的出生天數之內,取材過程應嚴格按照操作規程執行,制備出的血清要經過嚴格的質量鑒定。《用動物細胞體外培養生產生物制品規程》中的要求:牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家。并應具備適當的監測系統。有些國家還要求牛血清來自未用過反芻動物蛋白飼料的牛群。證明所用牛血清中不含對所生產疫苗病毒的抑制物。血清要通過濾膜過濾除菌,保證無菌。無細菌、霉菌、支原體和病毒的污染,有些國家要求無細菌噬菌體污染。對細胞有良好的支持繁殖作用。四川培養基制備器報價培養基制備器完全滅菌后用于單種微生物培養和鑒定,一般都是在無菌狀態下儲存,定量使用的。
培養基的實驗室制備:正確制備培養基時微生物檢驗的較基礎步驟之一。使用脫水培養基和其他成分,尤其是含有有毒物質(如膽鹽或其他選擇劑)的成分時,應遵守良好實驗室規范和生產廠商提供的使用說明。培養基的不正確制備會導致培養基出現質量問題。使用商品化脫水合成培養基制備培養基時,應嚴格按照廠商提供的使用說明配置。記錄所有相關數據,如質量/體積、pH、制備日期、滅菌條件和制備人員等。使用各別成分制備培養基時,應按照配方準確配制,記錄所有細節信息,如;培養基名稱和類型及試劑級別、每個成分物質含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無菌措施(包括實施的方式、溫度及時間)、配置日期、人員等,以便潮源。
培養基的實驗室制備:①概述:培養基和試劑的滅菌通常采用濕熱滅菌或過濾滅菌。有些培養基無需高壓滅菌,可煮滅菌。如,含亮綠的腸道菌培養基對光和熱特別敏感,應在煮沸后快速冷卻,避光保存。同樣,一些試劑則不需要滅菌,直接使用(參見相關標準或生產廠商的使用說明)。②濕熱滅菌;p濕熱滅菌在高壓鍋或培養基制備器中進行。高壓霉菌一般采用121℃±3℃霉菌15min。如果培養基的體積超過1000mL,要對滅菌條件進行適當的調整。所有操作均要按照標準和使用說明的規定進行。注:大容量培養基(>1000mL)滅菌時可能會造成過度加熱。加熱后應采取適當的方式冷卻,防止沸溢。這對大容量培養基和敏感性培養基(如含亮綠的培養基)是非常重要的。在液體培養基中的培養稱為液中培養、液體培養或液內培養。
微生物限度:細胞培養基不是無菌產品,其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養基中的營養物質滋生繁殖,導致細胞培養基變質失效。控制細胞培養基中細菌和霉菌,是延長細胞培養基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民當地藥典》2005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標準,并嚴于該標準,規定細胞培養基產品的細菌數每1g不得超過200個,霉菌數每1g不得超過50個。稱取樣品1g,加入無菌純化水10mL溶解,混勻即得試樣。按中華人民當地藥典2005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行,檢查項目為細菌數、霉菌數。檢查法采用平皿法。培養基制備器利用與外部水連接的盤狀熱交換器,能夠使內部迅速冷卻。四川培養基制備器報價
培養基在加熱消毒過程中、pH會有所變化,培養基各成分完全溶解后,應進行PH的初步調正。四川培養基制備器報價
簡單制作培養基,需要完成以下幾個主要步驟:需要對其進行消毒處理,普通介質使用121℃高壓蒸汽滅菌15分鐘。本發明適用于各種介質的制備,如無特殊要求,可用于滅菌。一些熱成分,如碳水化合物,應該單獨制備20%或更多的濃縮液,過濾或間斷殺菌,然后通過無菌操作技術加入到培養液中。在低溫下,明膠培養基也能殺菌。血、體液及素應經無菌處理后,加至約50℃冷卻培養基中。需要對培養基的質量進行檢測。每次處理完培養基,都要仔細檢查,如破損、浸漬、顏色異常、棉塞污染等,要進行篩選和棄置,才能確定pH值。培養基培養一晚,若有細菌生長,培養基將被丟棄。常規菌株接種1×2管或瓶培養基,24h培養,對生長不良或無菌的菌株進行培養,追蹤其產生原因,并反復接種。如不發生變化,應丟棄培養基,禁止使用。四川培養基制備器報價