關閉真空。同樣，溶液將被吸收到印跡架中，并且表面可能看起來干燥。重要提示：孵育10分鐘后，再抽真空。11.向下壓框架并施加真空。等待5至8秒鐘，直到框架完全空了。真空運行連續添加30 mL洗滌緩沖液（對于MultiBlot為15 mL）。重復洗滌步驟3次（共3次）4次洗滌）。12.關閉真空，然后從框架上取下吸墨架。從污點固定器中取出污點，并與適當的檢測試劑。如果使用了MultiBlot孔空白，則卸下并清洗。 擴展一級抗體孵育：一小時至過夜1.執行《通用議定書》的步驟1至5。2.加入2.5 mL（對于MultiBlot），5 mL（對于Mini blot）或10 mL（對于Midi blot）1X一抗（濃縮液）通常在標準免疫檢測過程中使用）。3.用蓋子蓋住吸墨紙固定架。如果需要的話，將其從底座質量有保障的超濾杯在哪里買您知道嗎？浦東新區Merck細胞跨膜電阻儀Merck儀器代理商

疫檢測對照，茴香霉素處理和PDGF處理的3T3小鼠成纖維細胞裂解液（10-0.63 ug）被轉移到Immobilon8-P膜上。印跡被阻止補充有0.5％脫脂奶粉（NFDM）的Tris緩沖鹽水含0.1％Tweeno 20表面活性劑（TBST），并用一級抗B-Tubulin進行探測（MAB3408）和次級HRP偶聯的山羊螞蟻（AP1 24P）在上述條件。將印跡暴露于X射線膠片一分鐘。維護SNAP i.d.o 2.0系統清理去除協議每次使用時應清潔SNAP i.d.o 2.0系統。清理去除鹽堿中的鹽或污染物和管道，抽吸真空并通過系統沖洗散去的水。注：請勿對SNAP i.d.9 2.0系統進行高壓滅菌。可以拆卸框架，并用中性清潔劑洗滌，然后用蒸餾水徹底沖洗。風干。要拆卸框架，請使用右側的藍色夾子調整框架的方靜安區MerckWB實驗加速器Merck儀器哪家好益啟生物公司帶您了解樣本制備儀詳情。

潤濕印跡。，對于大多數應用和大多數抗體而言，0.5％的脫脂/低脂干奶溶液可以提供足夠的膜的阻塞。注意：請勿使用濃度高于0. 5％的干奶，因為它可能會導致吸墨紙架堵塞膜。如果使用其他封閉溶液，請參閱表5了解兼容性和推薦濃度。●在洗滌，封閉和抗體緩沖液中始終使用0.1％Tween8 20表面活性劑。這將減少溶液的表面張力，并確保孵育過程中抗體在印跡支架中的均勻分布。●由于SNAP i.d. @ 2.0系統中的免疫檢測時間很短，因此建議在開始操作之前應準備一抗和二抗稀釋液。●MultiBlot固定器所需的稀釋抗體的總體積為2.5 mL，Mini blot固定器為5 mL，10 mL用于Midi印跡固定器。，每次需要洗30次（MultiBlot為15毫升），以確保每次洗完后都能完全清洗印跡孵化步驟。

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2.0系統計算SNAP i.d.9 2.0系統所需的抗體濃度用于標準免疫檢測的濃度標準SNAP i.d.o 2.0免疫檢測免疫檢測多印跡迷你印跡Midi污點_Ab濃度1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升1毫克/毫升所需抗體量_ 1微克0.25微克0.5微克1微克使用的抗體量30毫升2.5毫升5毫升10毫升比較終抗體稀釋1：30,0001：10,0001：10,0001：10,000使用的抗體庫存1微升0.25微升0.5微升1微升由于每種抗體都是只有一個的，并且檢測試劑的靈敏度各不相同，因此可能有必要進行調整抗體或抗原濃度，使用的檢測試劑的類型或靈敏度或印跡X射線曝光時間。請注意，本指南只作為開發比較終抗體的起點濃度以獲得所需的性能。表2.封閉，抗體和洗滌的建議體積SNAP i.d.o 2.0SNA浦東新區Merck細胞跨膜電阻儀Merck儀器代理商

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