牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下：1.**來源不同**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來源于牛痘病毒，是一種真核生物病毒中的酶。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來源于原核生物，如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu)，并且識別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT]，與DNA形成共價連接形成穩(wěn)定復(fù)合物，遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后，重新連接形成完整DNA鏈。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶，如大腸桿菌的ω蛋白，主要功能是催化DNA鏈斷開和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng)，以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子。5.**共價鍵形成**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價連接，此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價鍵。

在基因編輯中，Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點的突變，或在基因組中插入特定的DNA序列。Recombinant Human TSLPR Protein,His Tag

BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性對實驗結(jié)果有以下影響：1.**防止交叉污染**：BstDNA聚合酶具有較高的dUTP耐受性，這意味著它可以在反應(yīng)體系中添加dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)的情況下工作，有效防止LAMP產(chǎn)物的交叉污染，確保數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性。2.**保持靈敏度和擴(kuò)增效率**：即使在引入dUTP/UDG酶防污染系統(tǒng)，使用dUTP替換dTTP的情況下，BstDNA聚合酶的靈敏度及擴(kuò)增效率不受影響。實驗數(shù)據(jù)顯示，在反應(yīng)體系中添加dUTP對BstDNA聚合酶的擴(kuò)增靈敏度和效率沒有負(fù)面影響。3.**提高實驗的可靠性**：由于BstDNA聚合酶能夠在高濃度的dUTP存在下保持活性，這使得它在進(jìn)行等溫擴(kuò)增時更加可靠，尤其是在需要防止DNA污染的實驗中。4.**兼容dUTP/UDG系統(tǒng)**：BstDNA聚合酶對dUTP的耐受性好，高度兼容dUTP/UDG系統(tǒng)，這對于避免交叉污染和提高實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性至關(guān)重要。綜上所述，BstDNA聚合酶的高dUTP耐受性為等溫擴(kuò)增實驗提供了一個重要的優(yōu)勢，即在保持高靈敏度和擴(kuò)增效率的同時，能夠有效防止交叉污染，從而提高實驗結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。Recombinant Cynomolgus MFAP4 Protein,His TagFnCas12a包含約1300個氨基酸，含有RuvC-like結(jié)構(gòu)域，同時具有DNA和RNA內(nèi)切酶的活性。

T5核酸外切酶在基因編輯中確實有應(yīng)用，并且具有一些優(yōu)勢：1.**提高編輯效率**：根據(jù)一篇研究文章，T5核酸外切酶可以與CRISPR/Cas系統(tǒng)共表達(dá)或融合，以提高基因編輯的效率。這種共表達(dá)或融合可以增加indel（插入和缺失）頻率，盡管增加的幅度可能不大。2.**增強(qiáng)基因編輯效果**：在另一項研究中，通過使用螺旋-螺旋二聚體肽（coiled-coilpeptides）將T5核酸外切酶招募到Cas9或Cas12a蛋白上，可以提高基因編輯的效率，這種方法被稱為CCExo（CRISPR-Coiled-coil-Exonuclease）。這種招募方式優(yōu)于共表達(dá)和直接融合，其中強(qiáng)的親和力CC對顯示出高的突變頻率和刪除長度。3.**應(yīng)用于多種細(xì)胞類型**：CCExo系統(tǒng)在多種細(xì)胞系和原代細(xì)胞中都能有效地提高基因失活效率，并且在慢性髓性白血病（CML）患者的原代細(xì)胞以及異種移植動物模型中展示了其應(yīng)用潛力，這表明CCExo方法可能成為CML和其他遺傳性疾病的潛在選擇。T5核酸外切酶與CRISPR核酸酶蛋白進(jìn)行融合，并引入了核定位信號（NLS）序列以構(gòu)建表達(dá)載體，用于基因編輯。綜上所述，T5核酸外切酶在基因編輯中的應(yīng)用可以增強(qiáng)編輯效率和效果，尤其是在與CRISPR/Cas系統(tǒng)結(jié)合使用時。

牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I（VacciniaVirusDNATopoisomeraseI）是一種來源于牛痘病毒的I型真核拓?fù)洚悩?gòu)酶，具有以下功能和應(yīng)用：1.**功能**：-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I可以催化雙鏈DNA分子中單鏈DNA特定序列位置的磷酸二酯鍵的斷開和連接。-具有解超螺旋的酶(DNARelaxingEnzyme)活性，能夠通過快速的酶切和連接使雙鏈共價閉合環(huán)狀的正或負(fù)超螺旋DNA發(fā)生解超螺旋，形成含有較少的正或負(fù)超螺旋的雙鏈環(huán)狀DNA分子。-能夠使雙鏈DNA形成繩結(jié)(knotting)或解開繩結(jié)(unknotting)，聯(lián)結(jié)互補的單鏈環(huán)狀DNA成為雙鏈環(huán)狀DNA。2.**應(yīng)用**：-作為一種DNA重組連接的新型工具酶，用于DNA載體和重組片段的連接、缺刻修復(fù)、接頭連接等。-適用于TOPO克隆載體的制備、NGS建庫中的接頭連接等。-在TOPO克隆技術(shù)中，DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I同時具有限制酶和連接酶特性，其生物學(xué)功能是在復(fù)制期間切割并重新連接DNA。3.**使用方法**：-用于DNA快速酶切流程，包括配制體系反應(yīng)液、輕柔混勻、37℃孵育15分鐘等步驟。4.**儲存條件**：-建議在-25～-15℃保存，有效期為3年。5.**注意事項**：-避免起泡或劇烈攪拌、渦旋等操作，以防止酶失活。牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I因其獨特的功能，在分子生物學(xué)研究和基因工程中扮演著重要的角色。與一些其他 DNA 聚合酶不同，T4 DNA 聚合酶不具有 5’→3’外切酶活性，不會對 DNA 鏈的 5’端進(jìn)行切割和修飾。

為了確保PCR實驗中BstDNAPolymeraseI的活性比較大化，以下是一些關(guān)鍵的優(yōu)化措施：1.**反應(yīng)緩沖液**：使用適合BstDNAPolymeraseI的反應(yīng)緩沖液，如NEB提供的IsothermalAmplificationBufferIIPack，該緩沖液包含Tris-HCl、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4和Tween®20，pH值為8.8，專為等溫擴(kuò)增設(shè)計。2.**反應(yīng)條件**：BstDNAPolymeraseI的比較好反應(yīng)溫度通常在65°C左右。確保PCR儀能夠精確控制并保持這一溫度，以保證酶的活性和穩(wěn)定性。3.**酶的濃度**：根據(jù)反應(yīng)體系的需要調(diào)整BstDNAPolymeraseI的用量。過多的酶可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增，而過少則可能降低擴(kuò)增效率。通常，一個單位的酶能夠在65°C下，30分鐘內(nèi)將25nmol的dNTP摻入酸不溶性物質(zhì)。4.**Mg2+濃度**：Mg2+是DNA聚合酶活性的關(guān)鍵輔因子。其濃度對PCR反應(yīng)有影響，需要根據(jù)具體情況調(diào)整Mg2+濃度，以獲得比較好的擴(kuò)增效果。5.**dNTPs濃度**：dNTPs是DNA合成的基礎(chǔ)原料，其濃度約為200-300μM較為適宜。過高會增加非特異性擴(kuò)增。6.**引物設(shè)計**：設(shè)計特異性引物，通常長度為18-30個堿基，Tm（熔解溫度）相近，以保證同時退火。7.**模板DNA的質(zhì)量和純度**：確保模板DNA無蛋白質(zhì)、RNA和其他雜質(zhì)的污染，這些雜質(zhì)可能會抑制酶的活性。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白，并促進(jìn)E2上的泛素轉(zhuǎn)移到靶蛋白的賴氨酸殘基上，形成泛素化標(biāo)記。Recombinant Human B2M/beta 2-Microglobulin (His Tag)

泛素分子可以通過其內(nèi)部的賴氨酸殘基（如Lys48）與其他泛素分子形成多聚泛素鏈。Recombinant Human TSLPR Protein,His Tag

BstDNAPolymerase,LargeFragment（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段）是一種常用于分子生物學(xué)實驗的酶，特別是在等溫DNA擴(kuò)增技術(shù)中。以下是一些關(guān)于BstDNAPolymerase,LargeFragment的關(guān)鍵信息：1.**來源**：這種酶來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus），是一種熱穩(wěn)定的DNA聚合酶。2.**活性**：BstDNAPolymerase,LargeFragment具有5'到3'的DNA聚合酶活性，并且具有鏈置換活性，這使得它能夠用于等溫擴(kuò)增反應(yīng)，如環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增（LAMP）。3.**熱穩(wěn)定性**：由于其嗜熱特性，BstDNAPolymerase,LargeFragment能夠在較高的溫度下保持活性，通常在60-65°C。4.**應(yīng)用**：-**等溫擴(kuò)增**：用于LAMP和其他等溫擴(kuò)增技術(shù)，這些技術(shù)不需要傳統(tǒng)的熱循環(huán)儀。-**全基因組擴(kuò)增**：用于快速擴(kuò)增少量DNA樣本，以進(jìn)行進(jìn)一步的分析。-**突變檢測**：在某些情況下，用于檢測特定基因的突變。5.**優(yōu)點**：-**高保真度**：與某些其他DNA聚合酶相比，BstDNAPolymerase,LargeFragment具有較高的保真度。-**快速擴(kuò)增**：等溫擴(kuò)增技術(shù)可以在短時間內(nèi)快速產(chǎn)生大量DNA。Recombinant Human TSLPR Protein,His Tag