位孔收集盤與底座中的定位銷對(duì)齊。注意:對(duì)于Mini和Midi框架,將單個(gè)清潔托盤放置在底座的中央。對(duì)于多印跡如圖所示,在框架上放置兩個(gè)收集托盤。在MultiBlot框架中運(yùn)行單點(diǎn)印跡時(shí),將空白的卡放在空的孔中,然后將孔下方的收集盤上有污點(diǎn)。4.將污漬固定框架放回底座上的位置。5.按照《通用規(guī)程》第6步和第7步中的指示,應(yīng)用一抗并進(jìn)行孵育。6.孵育10分鐘后,打開真空并等待一分鐘,以確保所有螞蟻都具有被收集。注意:當(dāng)同時(shí)處理兩個(gè)框架時(shí),請(qǐng)先對(duì)一側(cè)進(jìn)行吸塵,然后再對(duì)另一側(cè)進(jìn)行吸塵。這確保在每個(gè)框架上具有完全的真空力,并改善體積回收率。7.關(guān)閉真空并卸下框架。卸下抗體收集盤。8.將抗體轉(zhuǎn)移到合適的容器中進(jìn)行存儲(chǔ)或分析。9.將印跡保持架放回原位,并繼續(xù)執(zhí)行通用規(guī)程的步驟9。 性能證明圖1. B-管蛋益啟生物公司帶您了解樣本制備儀詳情。Merck電阻儀Merck儀器
P i.d.o 2.0SNAP i.d. @ 2.0多印跡框架迷你相框中框阻塞溶液量每孔15毫升30毫升30毫升抗體量每孔2.5 mL5毫升10毫升洗滌緩沖液*量每孔4x 15 mL每個(gè)4x 30 mL每個(gè)4x 30 mL●Tris或磷酸鹽緩沖鹽溶液,補(bǔ)充有0.1%Tweene 20表面活性劑在計(jì)算免疫檢測(cè)所需的抗體量時(shí),三個(gè)要素對(duì)于成功檢測(cè)出蛋白質(zhì)并獲得了高質(zhì)量的印跡(低背景,高信號(hào)):●樣品類型和凝膠上樣濃度●一級(jí)和二級(jí)抗體濃度●檢測(cè)試劑的種類和靈敏度下表中的所有抗體均使用LuminataTM Forte化學(xué)發(fā)光檢測(cè)試劑進(jìn)行了測(cè)試。對(duì)于SNAP i.d. @ 2.0系統(tǒng),抗體濃度高于標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)中的濃度,但濃度較低體積。 表3.標(biāo)準(zhǔn)免疫檢測(cè)中一抗稀釋的實(shí)例 SNAPi.d.?2.0免疫檢長(zhǎng)寧區(qū)Merck儀器咨詢報(bào)價(jià)上海益啟生物超濾杯訂購方便。
utiBlot框架用于在MultiBlot框架中進(jìn)行單點(diǎn)印跡時(shí),放置正確處理一次印跡,然后空白卡在空井。未放入空白卡空井清潔不足確保框架中央的所有系統(tǒng)墊片和閥門均處于院長(zhǎng),無碎屑或鹽分。清空真空瓶,然后更換串聯(lián)的Milx9-FA過濾器??赡苡捎谝韵略蚨氯宋P座:濃度在補(bǔ)充有緩沖劑的緩沖液中使用0.2-0.5%的干奶脫脂/低脂干0.1%Tweens 20表面活性劑,帶有新的污點(diǎn)固定器。牛奶太高不兼容的封閉液使用新的吸盤固定器更換為強(qiáng)力封閉液。吸墨紙架的重復(fù)使用吸筆座只供一次性使用。請(qǐng)勿重復(fù)使用。低信號(hào)或低信號(hào)初級(jí)和/或次級(jí)將抗體濃度增加5到8倍。比標(biāo)準(zhǔn)抗體濃度過低免疫檢測(cè)上下顛倒標(biāo)記印跡的蛋白質(zhì)一側(cè),并確保該污點(diǎn)檢測(cè)試劑不敏感更換靈敏度更高的檢測(cè)試劑,例如足夠的Luminata用Forte
盤,請(qǐng)?jiān)诓襟E5之后插入托盤。有關(guān)詳細(xì)信息,請(qǐng)參閱“抗體恢復(fù)”部分。 6.在整個(gè)表面上涂適量的一抗吸墨紙架的數(shù)量(對(duì)于MultiBlot為2.5毫升,對(duì)于迷你吸墨紙為5毫升,或10 mL用于Midi印跡)。7.在室溫下孵育10分鐘。解決方案將是吸收到污點(diǎn)固定器中,表面可能會(huì)變干。重要提示:請(qǐng)勿在吸塵器清潔后再使用真空吸塵器。孵育10分鐘。8.向下壓框架并施加真空。等待5-8秒,直到框架完全是空的。9.在連續(xù)運(yùn)行真空的情況下,添加30 mL洗滌緩沖液(MultiBlot為15毫升)。重復(fù)洗滌步驟3次以上(總共4次洗滌)。當(dāng)框架完全為空時(shí),將TURN真空關(guān)閉。10.在印跡架的表面上涂適量的二抗(對(duì)于多印跡,為2.5 mL,5毫升用于迷你印跡,或10毫升用于Midi印跡)。在室溫下孵育10分鐘,然后關(guān)于細(xì)胞分析儀的詢價(jià)電話。
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疫檢測(cè)對(duì)照,茴香霉素處理和PDGF處理的3T3小鼠成纖維細(xì)胞裂解液(10-0.63 ug)被轉(zhuǎn)移到Immobilon8-P膜上。印跡被阻止補(bǔ)充有0.5%脫脂奶粉(NFDM)的Tris緩沖鹽水含0.1%Tweeno 20表面活性劑(TBST),并用一級(jí)抗B-Tubulin進(jìn)行探測(cè)(MAB3408)和次級(jí)HRP偶聯(lián)的山羊螞蟻(AP1 24P)在上述條件。將印跡暴露于X射線膠片一分鐘。維護(hù)SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)清理去除協(xié)議每次使用時(shí)應(yīng)清潔SNAP i.d.o 2.0系統(tǒng)。清理去除鹽堿中的鹽或污染物和管道,抽吸真空并通過系統(tǒng)沖洗散去的水。注:請(qǐng)勿對(duì)SNAP i.d.9 2.0系統(tǒng)進(jìn)行高壓滅菌。可以拆卸框架,并用中性清潔劑洗滌,然后用蒸餾水徹底沖洗。風(fēng)干。要拆卸框架,請(qǐng)使用右側(cè)的藍(lán)色夾子調(diào)整框架的方Merck電阻儀Merck儀器
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