耐高鹽全能核酸酶(SaltActiveUltraNuclease)是一種重組非特異性核酸內(nèi)切酶,具有以下特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**來源與表達(dá)**:耐高鹽全能核酸酶來源于海洋微生物,通過基因工程改造在大腸桿菌(_Escherichiacoli_)中表達(dá)純化。2.**活性條件**:在0.5MNaCl條件下具有比較好活性,這使得它在高鹽環(huán)境下也能保持高效。3.**應(yīng)用領(lǐng)域**:-**病毒純化、疫苗生產(chǎn)**:作為宿主殘留核酸去除試劑,將宿主殘留核酸降至皮克(pg)級(jí)別,提高生物制品功效和安全性。-**蛋白和多糖類制藥工業(yè)**:用于去除核酸污染,降低細(xì)胞上清和細(xì)胞裂解液的粘度,提高蛋白純化效率及功能研究。-**防止細(xì)胞結(jié)團(tuán)**:有效防止細(xì)胞和疫苗研究中外周血單核細(xì)胞(PBMC)的結(jié)團(tuán)。4.**產(chǎn)品性質(zhì)**:-分子量:24.7kDa。-等電點(diǎn):9.61。-純度:≥99%。-酶活:250-300U/μL。-適溫度:37℃(工作范圍0-42℃)。-輔助因子:1-10mMMg2+。5.**儲(chǔ)存條件**:以無菌液體酶的形式提供,儲(chǔ)存于緩沖液(25mMTris-HCl,5mMMgCl2,500mMNaCl,50%Glycerol,pH7.5)中,無色透明液體。干冰運(yùn)輸,-15℃~-25℃保存,有效期2年。Cas12a不僅具有順式切割活性,還具備獨(dú)特的反式切割活性,這使得它能夠無差別地裂解附近的單鏈DNA。Recombinant Mouse TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag
BsuDNAPolymerase(嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶)與其他DNA聚合酶相比,具有一些獨(dú)特的特性和優(yōu)勢:1.**鏈置換活性**:BsuDNAPolymerase保留了BacillussubtilisDNA聚合酶I的5'→3'聚合酶活性,但缺乏5'→3'核酸外切酶結(jié)構(gòu)域,這使得它具有鏈置換DNA合成的能力。這種能力對(duì)于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)如重組酶聚合酶擴(kuò)增(RPA)和環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)非常重要,因?yàn)樗梢苑蛛x雙鏈DNA,允許新的DNA鏈的合成。2.**溫度穩(wěn)定性**:BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性,這使得它適用于需要在較高溫度下進(jìn)行的擴(kuò)增反應(yīng),如RPA技術(shù)中的65°C反應(yīng)條件。3.**無核酸外切酶活性**:BsuDNAPolymerase缺乏3'→5'和5'→3'核酸外切酶活性,這意味著它不會(huì)像某些其他聚合酶那樣在合成過程中具有校對(duì)功能。這可以減少非特異性擴(kuò)增,提高擴(kuò)增的特異性。4.**高靈敏度和特異性**:BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度,能夠?qū)⑽⒘亢怂崮0鍞U(kuò)增到可檢測水平,同時(shí)保持高特異性。5.**簡化的操作流程**:與其他需要復(fù)雜操作和多個(gè)步驟的DNA聚合酶相比,BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)中的應(yīng)用簡化了操作流程,因?yàn)樗恍枰獰嵫h(huán)儀,這使得它適合現(xiàn)場快速檢測和診斷。
核酸內(nèi)切酶VIII(EndonucleaseVIII)是一種來自大腸桿菌的DNA損傷修復(fù)酶,具有以下特點(diǎn):1.**雙功能活性**:核酸內(nèi)切酶VIII具有N-糖基化酶(N-glycosylase)活性和AP裂解酶(AP-lyase)活性。2.**釋放受損嘧啶堿基**:N-糖基化酶活性可以釋放雙鏈DNA上受損的嘧啶堿基,如胸腺嘧啶乙二醇和尿嘧啶乙二醇,生成一個(gè)脫嘌呤(apurinic,AP)位點(diǎn)。3.**切割A(yù)P位點(diǎn)**:AP裂解酶活性可以切割A(yù)P位點(diǎn)的3'和5'端,產(chǎn)生一個(gè)具有3'和5'磷酸的堿基缺口(Gap)。4.**識(shí)別并切除受損堿基**:核酸內(nèi)切酶VIII可以識(shí)別并切除多種受損堿基,包括尿素、5,6-二羥基胸腺嘧啶、胸腺嘧啶乙二醇、5-羥基-5-甲內(nèi)酰脲、尿嘧啶乙二醇、6-羥基-5,6-二氫胸腺嘧啶和甲基羥丙二酰脲。5.**與EndonucleaseIII的區(qū)別**:雖然核酸內(nèi)切酶VIII與核酸內(nèi)切酶III相似,但核酸內(nèi)切酶VIII具有β和δ裂解酶活性,而核酸內(nèi)切酶III具有β裂解酶活性。6.**應(yīng)用領(lǐng)域**:核酸內(nèi)切酶VIII可以應(yīng)用于單細(xì)胞凝膠電泳、NGS建庫中DNA損傷修復(fù)、酶法合成DNA中釋放DNA鏈、堿洗脫,搭配尿嘧啶-DNA糖基化酶(UDG)進(jìn)行含U片段的克隆等。
T5核酸外切酶在基因克隆中的優(yōu)勢主要體現(xiàn)在以下幾個(gè)方面:1.**高效性**:T5核酸外切酶依賴性組裝(TEDA)方法在常規(guī)克隆中的效率與使用專有DNA聚合酶的商業(yè)In-Fusion方法相似,但高于使用T5核酸外切酶、PhusionDNA聚合酶和DNA連接酶的Gibson方法。2.**低成本**:TEDA方法每個(gè)反應(yīng)使用0.04U的T5核酸外切酶,價(jià)格為0.25美分,具有很高的成本效益。3.**簡單性**:TEDA方法的反應(yīng)混合物非常簡單,易于操作,這使得它在預(yù)算有限的實(shí)驗(yàn)室中尤其有用。4.**靈活性**:TEDA方法能夠組裝多個(gè)DNA片段,并在多個(gè)位點(diǎn)同時(shí)進(jìn)行定點(diǎn)誘變,提供了一種靈活的克隆和突變方法。5.**陽性克隆率**:使用T5核酸外切酶的無縫克隆技術(shù)可以確保100%的陽性克隆率,這提高了實(shí)驗(yàn)的成功率。6.**協(xié)同作用**:在無縫克隆中,T5核酸外切酶與Phusion高保真DNA聚合酶和TaqDNA連接酶協(xié)同作用,通過切割、填補(bǔ)和連接三個(gè)步驟,高效地完成DNA片段的連接。7.**減少污染**:T5核酸外切酶可以降解堿裂解提取質(zhì)粒中的變性DNA,減少超螺旋DNA的污染,提高DNA克隆和轉(zhuǎn)染效率。這些優(yōu)勢使得T5核酸外切酶成為基因克隆中一個(gè)非常有價(jià)值的工具,尤其是在需要高效、低成本和操作簡便的實(shí)驗(yàn)環(huán)境中。去泛素化酶(Deubiquitinating enzymes, DUBs)可以去除泛素化蛋白上的泛素鏈,使泛素分子得以回收和再利用。
BloodGenomicDNAIsolationKitwithMagneticBeads是一種利用磁珠技術(shù)從血液中提取基因組DNA的試劑盒。以下是一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用:1.**高效提取**:該試劑盒采用特殊的磁珠和緩沖體系,能夠快速且高效地從100μl至1ml的血液中分離和純化高質(zhì)量的基因組DNA。2.**磁珠特性**:獨(dú)特的磁珠具有很強(qiáng)的核酸親和力,在特定條件下可以快速分離和純化核酸。這些磁珠對(duì)磁場響應(yīng)迅速,使得提取過程既安全又便捷。3.**提取過程**:血液樣本在裂解液和蛋白酶K的作用下迅速裂解,釋放出的基因組DNA與磁珠特異性結(jié)合。通過磁分離架的作用,磁珠與溶液快速分離,經(jīng)過洗滌去除雜質(zhì),用洗脫液將基因組DNA從磁珠上洗脫下來。4.**應(yīng)用廣**:提取的基因組DNA可用于多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如PCR擴(kuò)增、酶切、基因分型、Southern雜交、高通量測序、基因組DNA文庫構(gòu)建等。5.**操作簡便**:整個(gè)抽提過程大約需要50分鐘,操作簡便,無需使用有毒有害的有機(jī)試劑,如酚或氯仿,提高了實(shí)驗(yàn)的安全性。6.**高純度和高回收率**:提取的DNA純度高,A260/A280通常在1.7-1.9之間,表明蛋白和RNA的污染低。回收率通常超過80%。
泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激發(fā)泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。Recombinant Mouse TEM7R/PLXDC2 Protein,His Tag
T7EndonucleaseI(T7EI)在CRISPR/Cas9基因編輯中的應(yīng)用主要體現(xiàn)在突變體檢測和基因編輯效率評(píng)估上。以下是T7EI在CRISPR/Cas9中的具體應(yīng)用步驟和特點(diǎn):1.**基因編輯效率評(píng)估**:-T7EI用于評(píng)估CRISPR-Cas9在給定的導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)上對(duì)細(xì)胞群體進(jìn)行基因編輯的效率。-通過PCR擴(kuò)增圍繞CRISPR導(dǎo)向RNA靶位點(diǎn)的基因組DNA,如果CRISPR-Cas9介導(dǎo)的非同源末端連接(NHEJ)修復(fù)事件引入了突變,變性和退火將形成突變型和野生型PCR擴(kuò)增子的異源雙鏈DNA。2.**突變體檢測**:-如果CRISPR/Cas9編輯成功在DNA上引入突變,則可與野生型DNA片段退火產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。T7EI可以識(shí)別該DNA上的不完全配對(duì)的DNA位點(diǎn)然后進(jìn)行雙鏈切割,通過瓊脂糖凝膠電泳即可顯示酶切后的條帶,從而半定量判定基因編輯效果。-T7EI能識(shí)別長度大于或等于2bp的插入、缺失或突變導(dǎo)致的錯(cuò)配DNA,不能識(shí)別1bp的插入、缺失或突變。3.**實(shí)驗(yàn)步驟**:-收集細(xì)胞并提取基因組DNA,然后使用PCR擴(kuò)增期望編輯的基因組區(qū)域。擴(kuò)增子的長度建議為0.5-1kb。-對(duì)擴(kuò)增的DNA進(jìn)行變性和退火復(fù)性,以產(chǎn)生異質(zhì)雙鏈DNA。-使用T7EI酶處理退火后的DNA產(chǎn)物,在37℃孵育15分鐘。
Recombinant Human IL-17 Protein
Recombinant Cynomolgus NKG2D/CD314 Protein
Recombinant Human CD37 Protein
Recombinant Human TPO Protein
Recombinant Mouse LYPD3 Protein
Recombinant Human LILRB1/CD85j/ILT2 Protein
Recombinant Rat GFRAL/GFR alpha-like Protein
Recombinant Human ULBP-2 Protein
Recombinant Mouse LTBR Protein
Recombinant Canine CD46 Protein