ExoIII(ExonucleaseIII)和Lambda核酸外切酶(λExonuclease)在DNA末端處理上的主要不同點(diǎn)如下:1.**作用方向**:-**ExoIII**:具有3'→5'外切脫氧核糖核酸酶活性,它從DNA鏈的3'-OH末端逐步切去單核苷酸。-**Lambda核酸外切酶**:是一種5'→3'核酸外切酶,能選擇性地沿5'→3'方向消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。2.**底物特異性**:-**ExoIII**:適底物是平末端或5'末端突出的DNA,但也可以作用于雙鏈DNA切刻位點(diǎn)產(chǎn)生單鏈缺口。由于對(duì)單鏈DNA無(wú)活性,因此難以切割3'突出末端。-**Lambda核酸外切酶**:適底物是5'磷酸化的雙鏈DNA,對(duì)單鏈DNA和5'端未磷酸化修飾的DNA的酶切活性較低,不能從DNA的切刻或缺口處起始消化。3.**活性差異**:-**ExoIII**:對(duì)具有3'-突出末端(至少有4個(gè)堿基,且具有3'-末端C殘基)的DNA、單鏈DNA、硫代磷酸酯連接的核苷酸無(wú)活性。-**Lambda核酸外切酶**:對(duì)5'-OH端的切割速度比5'-P端慢約20倍;對(duì)單鏈DNA的酶切速度比雙鏈DNA慢約100倍。4.**應(yīng)用場(chǎng)景**:-**ExoIII**:可以用于生產(chǎn)特定方向的單鏈DNA,將線性化DNA設(shè)計(jì)成為一端為不切割末端(3'突出端),另一端則設(shè)計(jì)為易切割末端(平端或5'突出端)。
提取的病毒核酸可以直接用于多種實(shí)驗(yàn),主要包括:1.**實(shí)時(shí)熒光定量PCR(qPCR)**:這是一種常用的技術(shù),可以對(duì)病毒核酸進(jìn)行定量檢測(cè)。它通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)PCR過(guò)程中的熒光信號(hào)來(lái)確定病毒核酸的數(shù)量。例如,病毒核酸檢測(cè)就是基于此技術(shù),通過(guò)設(shè)計(jì)特異性引物和探針,對(duì)病毒的靶基因進(jìn)行定性檢測(cè)。2.**逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)**:這項(xiàng)技術(shù)用于檢測(cè)RNA病毒,通過(guò)將病毒RNA逆轉(zhuǎn)錄成cDNA,然后進(jìn)行PCR擴(kuò)增,以檢測(cè)病毒的存在。RT-PCR技術(shù)靈敏而且用途廣,可以用于檢測(cè)細(xì)胞、組織中RNA病毒的含量。3.**等溫?cái)U(kuò)增法**:包括環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增(LAMP)和切口延伸等溫?cái)U(kuò)增(NEAR),這些方法在恒溫條件下進(jìn)行,無(wú)需復(fù)雜的設(shè)備,適用于快速、現(xiàn)場(chǎng)的病毒核酸檢測(cè)。4.**數(shù)字PCR(dPCR)**:這是一種高度靈敏的技術(shù),可以對(duì)病毒核酸進(jìn)行定量。它通過(guò)將樣本分配到成千上萬(wàn)的微小反應(yīng)室中,每個(gè)反應(yīng)室單獨(dú)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,從而實(shí)現(xiàn)對(duì)病毒核酸的精確計(jì)數(shù)。5.**核酸雜交技術(shù)**:如熒光原位雜交(FISH),可以用于檢測(cè)特定病毒核酸序列在細(xì)胞或組織中的存在和定位。Recombinant Cynomolgus Tim-3/HAVCR2 Protein,His Tag泛素蛋白是一種在真核細(xì)胞中存在的小分子蛋白質(zhì),由76個(gè)氨基酸殘基組成,具有高度的保守性。
磁珠法PCR/DNA純化試劑盒與傳統(tǒng)純化方法相比具有以下優(yōu)勢(shì):1.**操作簡(jiǎn)便快捷**:磁珠法純化過(guò)程通常可以在15分鐘內(nèi)完成,包括結(jié)合、洗滌和洗脫步驟,無(wú)需復(fù)雜的離心或抽濾操作。2.**高純度和高回收率**:磁珠法純化得到的DNA純度高,通常回收率可以達(dá)到90%以上,適用于100bp以上的DNA片段的純化,對(duì)達(dá)到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。3.**適用性廣**:磁珠法PCR/DNA純化試劑盒適用于多種樣本類(lèi)型,包括PCR產(chǎn)物、酶切產(chǎn)物、連接產(chǎn)物等,也適用于低濃度樣品的濃縮。4.**安全性高**:操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑,更加環(huán)保和安全。5.**靈活性**:可以根據(jù)實(shí)際狀況靈活調(diào)節(jié)磁珠用量,適應(yīng)不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動(dòng)化和高通量**:磁珠法純化試劑盒適合手工操作,也可用于自動(dòng)化工作站或核酸自動(dòng)提取儀,實(shí)現(xiàn)高通量操作。7.**溫和的條件**:磁珠法條件溫和,對(duì)DNA的損傷小,適合后續(xù)的多種分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn),如酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測(cè)序、PCR、雜交等。8.DNA片段適應(yīng)性**:適用于從150bp到50kb的DNA片段的純化,能夠滿足大多數(shù)分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的需求。
CUT&RUN和ChIC是兩種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),它們有一些關(guān)鍵的區(qū)別:1.**技術(shù)原理**:-**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:ChIC技術(shù)利用抗體將感興趣的蛋白與ProteinA-MNase相結(jié)合來(lái)進(jìn)行DNA切割。ChIC的優(yōu)勢(shì)在于使用TF特異性抗體系住MNase,并只在結(jié)合位點(diǎn)裂解。-**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:CUT&RUN技術(shù)則是在核的輕微MNase處理后釋放單核小體和TF-DNA復(fù)合物,留下寡核小體。CUT&RUN通過(guò)在冰上進(jìn)行簡(jiǎn)短的消化反應(yīng),在TF結(jié)合的MNase擴(kuò)散到周邊的基因組和裂解可接近的染色質(zhì)之前在上清中恢復(fù)TF-DNA復(fù)合物。2.**操作步驟和簡(jiǎn)便性**:-**ChIC**:ChIC可能需要甲醛固定操作,這可能重新引入了ChIP-seq的一些問(wèn)題,如交聯(lián)導(dǎo)致的DNA和蛋白質(zhì)的化學(xué)修飾。-**CUT&RUN**:CUT&RUN簡(jiǎn)化了操作步驟,使用磁珠固定細(xì)胞核,適用于新鮮和冷凍組織樣本,縮短了生成DNA測(cè)序文庫(kù)的時(shí)間(1-2天)。3.**背景信號(hào)和信噪比**:-**ChIC**:ChIC產(chǎn)生的背景信號(hào)可能較高,因?yàn)樗赡苌婕暗椒翘禺愋缘腄NA切割。
牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I(VacciniaVirusDNATopoisomeraseI)與細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶的主要區(qū)別如下:1.**來(lái)源不同**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I來(lái)源于牛痘病毒,是一種真核生物病毒中的酶。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶則來(lái)源于原核生物,如大腸桿菌的ω蛋白等。2.**功能特性**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能夠解旋DNA的超螺旋結(jié)構(gòu),并且識(shí)別并切割雙鏈DNA末端[5’C(T)CCTT],與DNA形成共價(jià)連接形成穩(wěn)定復(fù)合物,遇到DNA的5’-OH基團(tuán)后,重新連接形成完整DNA鏈。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶,如大腸桿菌的ω蛋白,主要功能是催化DNA鏈斷開(kāi)和結(jié)合的偶聯(lián)反應(yīng),以改變DNA的拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)。3.**活性條件**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I即使在Mg2+不存在的條件下也顯示活性。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶可能需要Mg2+等金屬離子作為輔因子來(lái)發(fā)揮活性。4.**作用的DNA鏈**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I能使正負(fù)兩方的超螺旋分子均形成松散型。-原核生物由來(lái)的DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I只作用負(fù)鏈的超螺旋分子。5.**共價(jià)鍵形成**:-牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I與DNA形成共價(jià)連接,此酯鍵中所貯存的能量可能在切斷端的再結(jié)合上起著作用。-細(xì)菌DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶在原核生物中是游離型的5′-OH末端扣3′-磷酸末端與酶形成共價(jià)鍵。
FnCas12a可以識(shí)別不同的PAM序列,例如5'-TTN-3',這增加了它可以靶向的基因組區(qū)域 。Recombinant Human Factor H/CFH Protein,His Tag
UBE2L3在調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路中的作用可能對(duì)免疫反應(yīng)和炎癥過(guò)程至關(guān)重要。gp100 (619-627)
pA-MNase(蛋白A-微球菌核酸酶)在以下實(shí)驗(yàn)中特別有用:1.**ChIC(ChromatinImmunocleavage)**:這是一種用于研究蛋白質(zhì)-DNA相互作用的技術(shù),pA-MNase在此技術(shù)中用于在免疫沉淀后切割染色質(zhì)DNA,以分析特定蛋白質(zhì)與DNA的結(jié)合位點(diǎn)。2.**CUT&RUN(CleavageUnderTargetsandReleaseUsingNuclease)**:這是一種蛋白質(zhì)-基因組互作研究技術(shù),pA-MNase在此技術(shù)中用于在目標(biāo)蛋白質(zhì)被抗體識(shí)別后,通過(guò)核酸酶活性切割附近的DNA,從而釋放與目標(biāo)蛋白質(zhì)相互作用的DNA片段。CUT&RUN技術(shù)相比傳統(tǒng)的ChIP-Seq具有實(shí)驗(yàn)周期短、信噪比高、可重復(fù)性好以及細(xì)胞投入量低的優(yōu)勢(shì),尤其適用于早期胚胎發(fā)育、干細(xì)胞、**以及表觀遺傳學(xué)等研究領(lǐng)域。3.**染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)**:pA-MNase在染色質(zhì)免疫沉淀實(shí)驗(yàn)中用于染色質(zhì)片段化,它在核小體間DNAlinker上進(jìn)行切割保持了核小體的完整性,并且由于其溫和的酶解條件,消除了超聲功率的可變性和超聲過(guò)程中染色質(zhì)乳化所帶來(lái)的負(fù)面影響。4.**去除核酸污染**:pA-MNase也可用于去除細(xì)胞裂解液中的核酸,以減少樣品的粘度,這對(duì)于后續(xù)的蛋白質(zhì)分析實(shí)驗(yàn)尤為重要。
Recombinant Human SPARC(BM-40)
Recombinant Human SLPI Protein
C-telopeptide
Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse LIX/CXCL5
Recombinant Human VEGFR1/FLT-1 Protein
NY-BR-1 p904 (A2)
Recombinant Mouse CDH3/Cadherin 3 Protein
Recombinant Human CHRDL1 Protein