重組Exendin-4是一種基于Exendin-4的重組蛋白,Exendin-4是一種從墨西哥蜥蜴(Gilamonster)的毒液中分離出來的39個氨基酸的多肽。它與胰高的血糖素樣肽-1(GLP-1)具有53%的序列同源性,并與相同的膜受體相互作用。重組Exendin-4在體內增強依賴葡萄糖的胰島素分泌,抑制不適當的高胰高的血糖素分泌,并減慢胃排空。它還在體外和動物模型中促進β細胞增殖和新生。重組Exendin-4是通過大腸桿菌表達的合成DNA序列編碼的39個氨基酸的Exendin-4。重組Exendin-4的特點包括:-分子量約為4.2kDa,是一個非糖基化的單一多肽鏈,包含39個氨基酸。-具有調節血糖水平、減少胰島素抵抗、降低胰高的血糖素、降低糖化血紅蛋白(HbA1c)和刺激β細胞生長以促進胰島素產生等多種生物活性。-通常以凍干粉的形式提供,需要在無菌條件下用無菌蒸餾水或含有0.1%BSA的水溶液復溶。-純度高于96%,通過SDS-PAGE和HPLC分析確定。-內毒的素含量低于10EU/mg,通過LAL方法測定。在實驗中,可以通過以下方法來優化重組Exendin-4的熒光特性:1.選擇合適的激發和發射波長。2.優化激發和發射濾光片。3.評估熒光量子產率。4.調整緩沖液條件,包括pH值和離子強度。5.控制溫度和氧濃度。CRISPR-Cas12a(以前稱為Cpf1)是一種類II型V型內切酶,偏好富含胸腺嘧啶的原間隔短回文重復序列鄰近基序。Recombinant Human IGF2R Domain 1-3 Protein,His-Avi Tag
為了確保PCR實驗中BstDNAPolymeraseI的活性比較大化,以下是一些關鍵的優化措施:1.**反應緩沖液**:使用適合BstDNAPolymeraseI的反應緩沖液,如NEB提供的IsothermalAmplificationBufferIIPack,該緩沖液包含Tris-HCl、(NH4)2SO4、KCl、MgSO4和Tween®20,pH值為8.8,專為等溫擴增設計。2.**反應條件**:BstDNAPolymeraseI的比較好反應溫度通常在65°C左右。確保PCR儀能夠精確控制并保持這一溫度,以保證酶的活性和穩定性。3.**酶的濃度**:根據反應體系的需要調整BstDNAPolymeraseI的用量。過多的酶可能導致非特異性擴增,而過少則可能降低擴增效率。通常,一個單位的酶能夠在65°C下,30分鐘內將25nmol的dNTP摻入酸不溶性物質。4.**Mg2+濃度**:Mg2+是DNA聚合酶活性的關鍵輔因子。其濃度對PCR反應有影響,需要根據具體情況調整Mg2+濃度,以獲得比較好的擴增效果。5.**dNTPs濃度**:dNTPs是DNA合成的基礎原料,其濃度約為200-300μM較為適宜。過高會增加非特異性擴增。6.**引物設計**:設計特異性引物,通常長度為18-30個堿基,Tm(熔解溫度)相近,以保證同時退火。7.**模板DNA的質量和純度**:確保模板DNA無蛋白質、RNA和其他雜質的污染,這些雜質可能會抑制酶的活性。Recombinant Human VEGF-C/Flt4-L Protein,His-Avi Tag激發的泛素被轉移到泛素結合酶E2的活性位點半胱氨酸殘基上,形成E2-泛素硫酯中間體。
檢測重組EGFP(增強型綠色熒光蛋白)的活性和穩定性通常涉及一系列生物化學和分子生物學實驗方法。以下是一些常用的檢測方法:1.**SDS-PAGE電泳**:-通過SDS-PAGE電泳分析EGFP的純度和分子量。-觀察是否有蛋白質降解或聚合的跡象。2.**WesternBlot**:-使用特異性的GFP抗體進行Westernblot,以檢測EGFP蛋白的存在和大小。-可以評估EGFP的表達水平和純度。3.**熒光光譜分析**:-使用熒光光譜儀測量EGFP的激發和發射光譜。-評估熒光強度和比較大激發/發射波長,以確定其熒光特性。4.**流式細胞儀分析**:-如果EGFP融合蛋白表達在細胞中,可以使用流式細胞儀分析細胞群體的熒光強度。-這有助于評估EGFP的表達水平和細胞內分布。5.**熒光顯微鏡觀察**:-在熒光顯微鏡下觀察EGFP的亞細胞定位和表達模式。-通過時間序列成像,可以評估EGFP在活細胞中的動態變化和穩定性。6.**熱穩定性分析**:-通過逐漸升高溫度并測量熒光強度的變化,可以評估EGFP的熱穩定性。-熱穩定性差的EGFP可能會在高溫下迅速失去活性。7.**光穩定性測試(光漂白實驗)**:-通過持續光照并監測熒光強度的下降(光漂白),可以評估EGFP的光穩定性。
BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)是一種來源于嗜熱脂肪芽孢桿菌(Bacillussubtilis)的DNA聚合酶。這種酶保留了BsuDNAPolymeraseI的5'-3'聚合酶活性,但缺失了5'-3'核酸外切酶結構域,因此它具有鏈置換活性,可以用于重組酶聚合酶擴增(RPA)等恒溫擴增技術。以下是BsuDNAPolymerase(LargeFragment,5U/μL)的一些關鍵特性和應用:1.**活性定義**:在37°C條件下,30分鐘內將10nmol的dNTP摻入酸不溶性物質所需的酶量定義為1個活性單位(U)。2.**熱失活條件**:75°C,20分鐘。3.**酶保存液成分**:25mMTris-HCl,50mMNaCl,1mMDTT,0.1mMEDTA,50%Glycerol,pH7.4@25°C。4.**儲存條件**:-25~-15°C保存,有效期2年。5.**注意事項**:-由于缺乏3'-5'核酸外切酶活性,BsuDNAPolymerase(LargeFragment)不能切除3'未配對的突出末端,因而不適用于生成平齊末端。-25°C時BsuDNAPolymerase(LargeFragment)保留50%的活性,是同溫度下Klenow片段(3'-5'exo-)的兩倍。6.**應用**:-隨機引物法標記。-cDNA第二條鏈的合成。-單個dA的加尾。-鏈置換的DNA合成。泛素連接酶E3識別特定的靶蛋白,并促進E2上的泛素轉移到靶蛋白的賴氨酸殘基上,形成泛素化標記。
EndoS糖苷內切酶在抗體藥物偶聯物(ADCs)的制備中發揮著至關重要的作用。EndoS是一種特異性的內切糖苷酶,它能夠從IgG重鏈的N-糖基中切割N-連接的糖鏈。這種特異性使得EndoS在改造抗體的糖鏈結構時非常有用,尤其是在開發定點ADCs時。在ADCs的制備過程中,EndoS的作用主要體現在以下幾個方面:1.**糖鏈切割**:EndoS能夠特異性地水解抗體Fc片段上的N-糖鏈,為后續的糖鏈改造和藥物偶聯提供條件。2.**糖鏈改造**:EndoS可以用于去除抗體上的原有糖鏈,然后通過酶的催化作用,將特定的糖鏈結構重新連接到抗體上,實現糖鏈的定點修飾。3.**定點偶聯**:通過EndoS的催化作用,可以將小分子細胞毒藥物通過特定的糖鏈結構“一步”定點連接到抗體的糖基化位點,簡化了ADCs的制備流程。4.**提高ADCs的均一性和穩定性**:EndoS介導的定點偶聯技術有助于獲得結構均一性更好、穩定性更高的ADCs,這對于提高藥物療效和減少副作用至關重要。5.**增強療效**:利用EndoS進行的定點偶聯可以提高ADCs的體內瘤抑制活性,即使在低載藥量的情況下也能保持高效的抗瘤效果。
Uracil-DNA Glycosylase (UDG) 是一種在DNA修復過程中起作用的酶,其主要功能是識別并去除DNA中的尿嘧啶堿基。Recombinant Human IGF2R Domain 1-3 Protein,His-Avi Tag
在基因編輯中,除了NLS-Cas9-EGFPNuclease,還有多種技術可以提高編輯的特異性,這些技術包括:1.**高保真Cas9變體**:通過工程化改造Cas9蛋白,例如使用SpCas9-HF1或eSpCas9等高保真變體,可以減少脫靶效應,提高特異性。2.**堿基編輯器(BaseEditors)**:這類編輯器可以在不產生DNA雙鏈斷裂的情況下直接在特定位置進行單個堿基的轉換,從而減少非目標編輯。3.**引導編輯器(PrimeEditors)**:由哈佛大學劉如謙教授團隊開發的引導編輯器可以在不依賴DNA雙鏈斷裂和同源定向修復的情況下,實現精細的基因組編輯。4.**CRISPRi和CRISPRa**:這兩種技術分別用于抑制或激起特定基因的表達,而不切割DNA,從而減少了脫靶風險。5.**新型CRISPR系統**:例如CRISPR/Cas12j和CRISPR/CasΦ,這些系統可能具有不同的PAM序列要求和更高的特異性。6.**AI輔助設計**:利用人工智能預測和優化sgRNA的設計,以減少脫靶效應。7.**優化遞送系統**:改進CRISPR組分的遞送方法,例如使用核糖核的蛋白(RNP)復合物,可以提高編輯效率和特異性。8.轉座子編輯系統:利用轉座子進行基因組編輯,可以在不依賴DNA雙鏈斷裂的情況下實現大片段DNA序列的插入。
Recombinant Biotinylated Human SEZ6 Protein
PTD-p65-P1 Peptide
Recombinant Human Angiostatin
Recombinant Human SPARC(BM-40)
Recombinant Human SLPI Protein
C-telopeptide
Recombinant Biotinylated Human MADCAM1 Protein
Recombinant Human PSGL-1 Protein
Recombinant Mouse LIX/CXCL5
Recombinant Human VEGFR1/FLT-1 Protein