重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應用中提高藥物穩定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內的循環時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩定性。例如,FGF21與HSA融合后,其體外穩定性提升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩定性增加。3.**改善藥代動力學**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學特性,如與特定受體的結合,增強藥物對特定組織或細胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結合,實現對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內源性蛋白質,具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應,提高藥物的安全性和耐受性。牛痘DNA拓撲異構酶I具有解超螺旋的活性,可以解開雙鏈閉合環狀DNA的超螺旋結構,便于后續的酶切反應。Recombinant Mouse CD47 Protein,His Tag
EndoH糖苷內切酶H在實驗中的特異性和效率通常通過以下幾個方面來確定:1.**特異性識別**:EndoH能夠特異性地識別并切割高甘露糖型N-連接糖鏈,這些糖鏈通常存在于未成熟的糖蛋白中。2.**切割位點**:EndoH識別并切割殼二糖結構中的β-1,4-糖苷鍵連接的甘露糖型結構糖鏈,但不能切割復雜型糖鏈糖蛋白。3.**酶活性測試**:通過使用標準糖蛋白底物進行酶活性測試,可以確定EndoH的活性和效率。4.**純化效果**:EndoH的純度可大于95%,這有助于確保實驗中酶的高效性。5.**比較分析**:與其他去糖基化酶(如PNGaseF)進行比較分析,可以評估EndoH的特異性和效率。6.**應用效果**:EndoH用于基于DNA測序的熒光輔助糖電泳(DSA-FACE)分析核糖核酸酶B(ribonucleaseB,RNaseB)的糖基結構,可以比較不同酶的糖基切割功能。7.**酶切時間**:EndoH的酶切時間通常為1-3小時,這有助于評估酶的效率。8.**產品信息**:通過查看產品信息,包括產品編號、規格和目錄價,可以了解EndoH的商業可用性和應用范圍。通過這些方法,研究人員可以確保EndoH在糖鏈分析中的特異性和效率,從而獲得準確的糖鏈結構信息。Recombinant Rat IL-1 beta Protein許多Probe qPCR Mix (2×)產品采用熱啟動DNA聚合酶,能減少非特異性擴增,提高反應的靈敏度和特異性 。
PNGaseF(肽-N-糖苷酶F)是一種普遍使用的酶,它可以從N-連接糖蛋白中去除幾乎所有類型的N-連接糖鏈。其活性和穩定性可能會在不同的pH條件下發生變化。根據NEB(NewEnglandBiolabs)提供的PNGaseF產品信息,PNGaseF的好的活性和穩定性pH為7.5。在pH7.5時,PNGaseF的活性可以達到100%。然而,酶在不同溫度下的活性表現也有所不同:在37°C時活性為100%,在30°C時也保持100%,而在23°C時活性下降到65%,17°C時為40%,在3°C時幾乎無活性。這表明PNGaseF的活性隨溫度降低而下降,盡管pH值對酶活性有重要影響,但溫度也同樣是一個重要因素。此外,PNGaseF的活性會受到SDS的抑制,因此在變性條件下進行酶切時,反應混合物中必須包含NP-40,以1:1的比例存在,以抵消SDS的抑制作用。對于非變性條件下的酶切,可能需要更多的酶和更長的孵育時間。在實驗操作中,為了確保PNGaseF的好的活性,建議按照制造商提供的推薦緩沖液和條件進行實驗。如果需要在不同的pH條件下使用PNGaseF,可能需要通過實驗優化來確定好的條件。
IdeSProtease的分子改造技術主要通過以下幾個方面提高其穩定性和比活性:1.**定向進化**:利用定向進化方法,通過多輪的突變和篩選,獲得具有改善特性的酶變體。定向進化不依賴于大規模突變文庫的構建,而是通過定點突變操作,顯著提高酶分子的穩定性。2.**半理性設計與理性設計**:結合半理性設計和理性設計的方法,通過計算模擬和結構分析,對酶的三維結構進行優化,以提高其在各種環境條件下的穩定性。3.**糖基化修飾**:作為一種新的酶分子穩定性改造技術,糖基化可以提高酶的穩定性,防止酶在逆境中的失活,從而提高其在實際應用中的催化活性。4.**消除蛋白質中的不穩定性弱點**:通過分析蛋白質結構中的穩定性弱點,進行定點突變,以增強蛋白質的整體穩定性。5.**提高比活性**:通過分子改造,提高IdeSProtease的比活性,使其在更低的濃度下就能有效地催化反應,從而提高整體的催化效率。6.**增加底物特異性**:改造后的IdeSProtease除了可以切割人IgG1~4、猴、羊、兔IgG外,還對小鼠IgG2a、IgG3具有特異性切割活性。。
確保重組EGFP(增強型綠色熒光蛋白)在實驗中的穩定性和活性,可以采取以下措施:1.**適當的儲存條件**:重組EGFP通常以凍干粉形式提供,應在-20°C至-80°C的低溫條件下儲存,以保持其穩定性。避免反復凍融,因為這可能導致蛋白質結構的破壞和活性的喪失。2.**正確的復溶方法**:在無菌條件下,使用推薦的溶劑(通常是無菌去離子水或適當的緩沖液)復溶EGFP,并避免使用含有蛋白酶或氧化劑的溶液。3.**避免光照**:EGFP對光照敏感,尤其是在紫外和藍光下。在處理和儲存時應避光,使用遮光容器或在低光照條件下操作。4.**使用保護劑**:在某些情況下,添加蛋白穩定劑(如甘油、蔗糖或BSA)可以提高EGFP的穩定性。5.**避免極端pH**:EGFP的活性和穩定性可能受到pH值的影響。在實驗中使用接近其等電點pH值的緩沖系統,通常是中性或略偏堿性的條件。6.**控制溫度**:避免將EGFP暴露在極端溫度下,尤其是在高溫條件下,因為這可能導致蛋白質變性。7.**避免物理剪切力**:在操作過程中,避免劇烈攪拌或超聲處理,因為這些可能會導致蛋白質結構的破壞。泛素激起酶E1(Ubiquitin-activating enzyme E1)在ATP的存在下激發泛素分子,形成E1-泛素硫酯中間體。3C Protease
隨后,泛素分子從E1轉移到泛素結合酶E2,再通過泛素連接酶E3的作用,將泛素分子連接到靶蛋白上。Recombinant Mouse CD47 Protein,His Tag
酵母重組表達的PNGaseF(N-糖苷酶F)是一種用于蛋白質去糖基化實驗的酰胺水解酶,具有以下特點以確保實驗中的活性和穩定性:1.**高效性**:具有高比活性,例如750000U/mL,這有助于快速高效地進行去糖基化反應。2.**穩定性**:在含有50%甘油的儲存緩沖液中,比較好的活性和穩定性可維持長達24個月。3.**使用條件**:可以在原生或變性條件下使用,對于變性條件下的去糖基化,建議添加NP-40以解除SDS的抑制作用。4.**儲存條件**:建議在-15~-25℃保存,有效期1年。5.**酶活定義**:1個酶活力單位指在10μL的反應體系中,37℃條件下1小時從10μg變性RNaseB中除去超過95%的碳水化合物所需要的酶量。6.**操作簡便**:提供了使用說明,包括變性和非變性條件下的蛋白質去糖基化步驟。7.**His標簽**:產品帶有His標簽,便于在實驗中進行純化和檢測。8.**純度**:純度達到95%以上,通過SDS-PAGE和完整ESI-MS進行確定。9.**快速反應**:有些產品如FastPNGaseF,可以在數分鐘內完成徹底且無偏好性地去糖基化。10.**注意事項**:產品供科研使用,操作時應穿戴適當的實驗室防護裝備。遵循這些指導原則和產品說明,可以確保PNGaseF在實驗中的活性和穩定性,從而獲得可靠的去糖基化結果。Recombinant Mouse CD47 Protein,His Tag
Recombinant Mouse Leptin Protein
Recombinant Human ACE2/ACEH (His Tag)
Recombinant Human IL-17 Protein
Recombinant Cynomolgus NKG2D/CD314 Protein
Recombinant Human CD37 Protein
Recombinant Human TPO Protein
Recombinant Mouse LYPD3 Protein
Recombinant Human LILRB1/CD85j/ILT2 Protein
Recombinant Rat GFRAL/GFR alpha-like Protein
Recombinant Human ULBP-2 Protein