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Recombinant Mouse FSHB Protein

來源: 發(fā)布時間:2024年09月09日

EndoS糖苷內(nèi)切酶S(Endo-S)的特異性主要體現(xiàn)在其對糖蛋白的糖鏈結(jié)構(gòu)的識別和切割能力上。以下是Endo-S的一些關(guān)鍵特異性特點:1.**糖鏈識別**:Endo-S能夠特異性識別糖鏈結(jié)構(gòu)中的某些特定序列或結(jié)構(gòu),尤其是N-連接糖鏈的殼二糖重要結(jié)構(gòu)。2.**切割位點**:Endo-S在糖鏈的特定位點進行切割,通常是在N-乙酰葡糖胺(GlcNAc)和天冬酰胺之間的β-N-糖苷鍵。3.**不影響抗原性**:Endo-S的切割位點選擇性高,不會破壞糖蛋白的抗原決定簇,因此在某些應(yīng)用中可以保持糖蛋白的免疫原性。4.**應(yīng)用多樣性**:Endo-S可以用于多種糖蛋白的去糖基化,包括抗體和其他具有N-連接糖鏈的蛋白質(zhì)。5.**研究和藥物開發(fā)**:在研究糖蛋白的結(jié)構(gòu)和功能時,Endo-S提供了一種工具來研究糖鏈對蛋白質(zhì)性質(zhì)的影響。此外,在藥物開發(fā)中,Endo-S用于制備糖鏈定點ADC化合物,通過精確控制藥物與抗體的連接點,提高藥物的療效和減少副作用。6.**兼容性**:Endo-S對多樣化的LacNAc修飾顯示出良好的兼容性,可以接受不同生物正交基團、熒光基團等衍生物作為底物,實現(xiàn)抗體糖基化修飾。7.**高效性**:Endo-S在催化糖鏈轉(zhuǎn)移或切割反應(yīng)中表現(xiàn)出高效性,有助于實現(xiàn)高效獲得功能修飾的糖工程抗體。利用His標(biāo)簽通過親和層析從細(xì)胞裂解物中純化目標(biāo)蛋白,然后可能通過離子交換層析、等方法進一步提純。Recombinant Mouse FSHB Protein,hFc Tag

Recombinant Mouse FSHB Protein,hFc Tag,標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)

N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白(RecombinantHumanUbiquitinProteinTagged-HisTag,UB)是一種經(jīng)過遺傳工程改造,在其N末端融合了His標(biāo)簽的泛素蛋白。以下是這種蛋白的一些特點:1.**His標(biāo)簽**:N末端His標(biāo)簽是一種常見的融合標(biāo)簽,用于提高蛋白質(zhì)的可溶性和便于通過親和層析進行純化。His標(biāo)簽通常由6到10個組氨酸(His)組成。2.**重組表達**:這種泛素蛋白通常在大腸桿菌(E.coli)或其他宿主細(xì)胞中通過重組DNA技術(shù)表達。3.**高度保守**:泛素蛋白是一個76個氨基酸殘基的多肽,在真核生物中高度保守。4.**分子量**:由于N末端添加了His標(biāo)簽,重組泛素蛋白的分子量會略大于天然泛素(約8.5kDa)。5.**純度**:重組泛素蛋白通常具有高純度(>95%bySDS-PAGE),適合用于各種生物化學(xué)和分子生物學(xué)實驗。6.**溶解性**:His標(biāo)簽的添加可以提高蛋白質(zhì)在水溶液中的溶解性,便于實驗操作。7.**穩(wěn)定性**:凍干粉形式的重組泛素蛋白在-25~-15℃保存,具有較長的有效期,通常為一年。8.**應(yīng)用廣**:N末端His標(biāo)簽的泛素蛋白可用于多種實驗,包括蛋白質(zhì)泛素化、E3泛素連接酶活性測定、蛋白質(zhì)相互作用研究等。Magainin 2在MAGE-A3基因序列的C末端添加His標(biāo)簽和Avi標(biāo)簽序列。His標(biāo)簽有助于通過金屬螯合親和層析進行蛋白純化。

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使用PreScissionProtease進行蛋白質(zhì)切割后,可以采用以下方法來提高產(chǎn)品的純度:1.**親和層析**:利用GST標(biāo)簽或His標(biāo)簽等進行一步或多步親和層析,以高純度分離目的蛋白。2.**離子交換層析**:根據(jù)蛋白質(zhì)的電荷特性,使用陽離子或陰離子交換層析進一步純化蛋白質(zhì)。3.**凝膠滲透層析**:通過分子大小的排阻,去除分子量較大或較小的雜質(zhì)。4.**反向?qū)游?*:使用反相高效液相色譜(HPLC)技術(shù),根據(jù)蛋白質(zhì)與固定相的疏水相互作用進行分離。5.**超濾/透析**:使用超濾膜或透析袋去除低分子量的雜質(zhì),如鹽分、緩沖液成分或小分子蛋白質(zhì)。6.**二次親和層析**:在初次親和層析后,可以進行二次親和層析以進一步提高純度。7.**蛋白質(zhì)純化柱**:使用商業(yè)化的蛋白質(zhì)純化柱,如GST-Sepharose或Ni-NTA柱,進行快速純化。8.**等電聚焦電泳**:通過等電聚焦電泳(IEF)分離具有不同等電點的蛋白質(zhì)。9.**SDS-PAGE**:使用SDS-PAGE凝膠電泳分析蛋白質(zhì)的純度,并可通過凝膠切片回收相對純凈的蛋白質(zhì)條帶。10.**質(zhì)譜分析**:利用質(zhì)譜技術(shù)鑒定蛋白質(zhì)的確切質(zhì)量和序列來確保蛋白質(zhì)的純度和正確性。

重組人血清白蛋白(rHSA)在藥物載體應(yīng)用中提高藥物穩(wěn)定性和靶向性的機制主要包括以下幾點:1.**延長半衰期**:通過與rHSA融合,可以延長藥物分子在體內(nèi)的循環(huán)時間。例如,阿必魯肽(Tanzeum)是GLP-1與HSA的融合蛋白,其半衰期可延長至5天,每周給藥一次即可。2.**提高穩(wěn)定性**:rHSA作為載體,可以保護藥物分子不受體內(nèi)酶解和其他降解因素的破壞,從而提高藥物的穩(wěn)定性。例如,F(xiàn)GF21與HSA融合后,其體外穩(wěn)定性升,抗胰蛋白酶降解能力和高溫條件下的穩(wěn)定性增加。3.**改善藥代動力學(xué)**:rHSA融合蛋白能夠改善藥物的藥代動力學(xué)特性,如改變藥物的分布和代謝,減少腎臟的損失,從而提高藥物在體內(nèi)的濃度和療效。4.**增強靶向性**:rHSA可以通過其天然的生物學(xué)特性,如與特定受體的結(jié)合,增強藥物對特定組織或細(xì)胞的靶向性。例如,rHSA可以通過其與FcRn受體的結(jié)合,實現(xiàn)對瘤組織的靶向性。5.**降低免疫原性**:rHSA作為一種內(nèi)源性蛋白質(zhì),具有較低的免疫原性,可以減少藥物引起的免疫反應(yīng),提高藥物的安全性和耐受性。GPRC5D蛋白在宿主細(xì)胞內(nèi)通過自組裝形成VLP。這一步驟通常在細(xì)胞內(nèi)發(fā)生,以提高VLP的產(chǎn)量和質(zhì)量。

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PNGaseF(肽-N-糖苷酶F)是一種普遍使用的酶,它可以從N-連接糖蛋白中去除幾乎所有類型的N-連接糖鏈。其活性和穩(wěn)定性可能會在不同的pH條件下發(fā)生變化。根據(jù)NEB(NewEnglandBiolabs)提供的PNGaseF產(chǎn)品信息,PNGaseF的好的活性和穩(wěn)定性pH為7.5。在pH7.5時,PNGaseF的活性可以達到100%。然而,酶在不同溫度下的活性表現(xiàn)也有所不同:在37°C時活性為100%,在30°C時也保持100%,而在23°C時活性下降到65%,17°C時為40%,在3°C時幾乎無活性。這表明PNGaseF的活性隨溫度降低而下降,盡管pH值對酶活性有重要影響,但溫度也同樣是一個重要因素。此外,PNGaseF的活性會受到SDS的抑制,因此在變性條件下進行酶切時,反應(yīng)混合物中必須包含NP-40,以1:1的比例存在,以抵消SDS的抑制作用。對于非變性條件下的酶切,可能需要更多的酶和更長的孵育時間。在實驗操作中,為了確保PNGaseF的好的活性,建議按照制造商提供的推薦緩沖液和條件進行實驗。如果需要在不同的pH條件下使用PNGaseF,可能需要通過實驗優(yōu)化來確定好的條件。

His-Avi Tag包含了特定肽段,分子量預(yù)測為50.20 kDa,但由于糖基化,其在Tris-Bis PAGE結(jié)果上遷移至55-60 kDa。A-779

牛痘DNA拓?fù)洚悩?gòu)酶I應(yīng)儲存在-20°C的環(huán)境中,這有助于保持其活性。在這種條件下,該酶可以保存長達3年。Recombinant Mouse FSHB Protein,hFc Tag

大腸桿菌表達的重組抑肽酶(Aprotinin)是一種通過基因工程技術(shù)在大腸桿菌中生產(chǎn)的蛋白酶抑制劑,具有以下特性和應(yīng)用:1.**來源**:重組抑肽酶是通過大腸桿菌(E.coli)表達系統(tǒng)生產(chǎn)的,確保了無動物源性成分,減少了病毒污染的風(fēng)險。2.**結(jié)構(gòu)**:它是一種單體球狀蛋白,由58個氨基酸組成,具有三個交聯(lián)二硫鍵的單個多肽鏈。3.**功能**:作為一種競爭性、可逆的絲氨酸蛋白酶抑制劑,重組抑肽酶能夠抑制胰蛋白酶、糜蛋白酶、激肽釋放酶和血纖維蛋白溶酶等的活性。4.**應(yīng)用**:在生物技術(shù)過程中,重組抑肽酶可以替代動物源性抑肽酶,用于重組蛋白生產(chǎn)中抑制絲氨酸蛋白酶的活性,以及在細(xì)胞培養(yǎng)等過程中。5.**產(chǎn)品信息**:通常以粉末形式提供,具有明確的貨號和規(guī)格,如1mg或10mg的包裝。6.**產(chǎn)品性質(zhì)**:包括外觀、溶解度、純度、蛋白含量、酶濃度和活性定義等詳細(xì)參數(shù)。7.**儲存條件**:凍干粉在2~8℃保存,有效期為2年。8.**使用方法**:推薦的結(jié)合pH>6.0,在pH<3.0的條件下不結(jié)合,可直接使用0.9%NaCl溶解,溶解后可-20℃儲存。9.**注意事項**:產(chǎn)品作科研用途,操作時需穿著實驗服并佩戴一次性手套。Recombinant Mouse FSHB Protein,hFc Tag

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