Lambda核酸外切酶的活性表現在其高度特異性和過程性地消化5'端磷酸化的雙鏈DNA。以下是一些關鍵點,描述了Lambda核酸外切酶的活性特征:1.**高度過程性(HighlyProcessive)**:Lambda核酸外切酶是一種高度過程性的5'→3'外切酶,這意味著它能夠連續消化多個核苷酸,而不需要在每一步之后重新結合底物。2.**底物特異性(SubstrateSpecificity)**:該酶選擇性地消化5'端磷酸化的雙鏈DNA鏈,對單鏈DNA和非磷酸化DNA表現出低活性。3.**活性定義(ActivityDefinition)**:一個活性單位定義為在37°C下,30分鐘內在50μl反應體積中,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer和1μg聲波破碎的雙鏈[3H]-DNA底物,產生10nmol酸溶性脫氧核苷酸所需的酶量。4.**反應條件(ReactionConditions)**:通常在37°C下進行孵育,使用1XLambdaExonucleaseReactionBuffer,該緩沖液包含67mMGlycine-KOH,2.5mMMgCl2,50μg/mlBSA,pH值為9.4。5.**熱失活(HeatInactivation)**:通過在75°C下加熱10分鐘可以使Lambda核酸外切酶失活。6.**特定活性(SpecificActivity)**:Lambda核酸外切酶的特定活性為50,000單位/毫克蛋白。
磁珠法質粒小量抽提試劑盒是一種利用磁性納米分離技術和細菌細胞的SDS堿裂解法從菌體中提取高質量質粒DNA的實驗工具。以下是一些關于磁珠法質粒小量抽提試劑盒的關鍵信息:1.**操作簡便性**:-操作快速簡單,可以在60分鐘內完成96個不同樣品的提取,實現質粒提取的高通量化和自動化。2.**高純度和高產量**:-抽提得到的質粒純度高,OD260/OD280比值一般為1.8~1.9之間,OD260/OD230比值大于2.0,可以直接用于轉化、DNA測序、PCR和酶切等后續實驗。3.**試劑盒組件**:-包含BufferMP1、BufferMP2、BufferMP3、PureMagBeads、BufferMPB、TEBuffer(pH8.0)、RNaseA等組分。4.**應用范圍**:-適用于從大腸桿菌中抽提小量質粒,所得質粒可直接用于細胞轉染、DNA測序、PCR等實驗。5.**效率和純度**:-與同類產品相比,提取效率更高,獲得質粒的純度更高;與柱式法相比,可減少離心次數,獲得完整性更好的質粒。6.**注意事項**:-例如,SgMagBeads需要充分洗滌和干燥,以保證無乙醇殘留,并且在吸取上清時避免吸入SgMagBeads。7.**保存條件**:-室溫保存,有效期一年。磁珠長期不使用時,可以4℃保存以延長保存時間。
5'DNA腺苷酰化試劑盒通過特定的酶催化反應,將5'-磷酸化的單鏈DNA(pDNA)轉化為5'-腺苷酰化DNA(AppDNA)。以下是啟用5'-磷酸化的單鏈DNA的一般步驟:1.**準備反應體系**:-根據試劑盒說明書,準備所需的反應組分,包括5'-磷酸化的單鏈DNA、腺苷酰化酶(如Adenylase或MthRNA連接酶)、ATP和相應的緩沖液。2.**混合組分**:-將5'-磷酸化的單鏈DNA與腺苷酰化酶、ATP和緩沖液混合在適當的反應容器中。3.**孵育反應**:-將混合好的反應體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉移到DNA的5'端。4.**酶失活**:-反應完成后,在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續的去腺苷酰化現象,確保腺苷酰化比率不下降。5.**產物收集**:-由于轉化效率高,通常不需要進行凝膠純化步驟。可以通過乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產物。6.**產物應用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后續的克隆、測序、連接或其他分子生物學實驗。7.**注意事項**:-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環境中進行,以避免污染。-使用時需注意反應體系的準確性,確保底物、酶和ATP的比例適當。
磁珠本身并不直接參與電泳過程,但它們可以用于電泳后的樣品處理,特別是在核酸(DNA或RNA)的提取和純化過程中。以下是使用磁珠進行電泳后樣品處理的一般步驟:1.**凝膠電泳**:-首先,將DNA或RNA樣品通過凝膠電泳進行分離。凝膠通常是瓊脂糖或聚丙烯酰胺凝膠,根據樣品的大小和類型選擇合適的凝膠濃度和緩沖體系。2.**觀察和切割**:-電泳完成后,使用紫外線照射凝膠并使用適當的染料(如EB或SYBRGreen)對DNA或RNA進行染色,以在紫外光下觀察到DNA或RNA的條帶。3.**樣品提取**:-確定目標DNA或RNA條帶后,使用干凈的工具(如切割器或移液槍)從凝膠中切割出含有目標分子的凝膠片段。4.**磁珠準備**:-根據磁珠試劑盒的說明書,準備磁珠。通常包括磁珠的重懸和可能的表面修飾,以確保它們能夠特異性地結合目標核酸。5.**樣品與磁珠混合**:-將切割出的凝膠片段轉移到含有磁珠的溶液中,溫和地混合以促進磁珠與核酸的結合。6.**磁分離**:-將含有磁珠和核酸的混合物置于磁分離架上,利用磁場使磁珠快速聚集在管底,從而實現與溶液的分離。7.**洗滌**:-移除未結合的溶液,向磁珠上加入洗滌液,再次進行磁分離以去除雜質。在基因編輯中,Pfu DNA Polymerase可以用于精確地引入特定位點的突變,或在基因組中插入特定的DNA序列。
T4UvsX重組酶是一種來源于T4噬菌體的酶,屬于RecA/Rad51家族的同源體。這種重組酶在雙鏈DNA斷裂的修復以及復制叉重新啟動的過程中扮演著重要角色。T4UvsX重組酶能夠與其他DNA結合蛋白或輔助因子協同作用,與單鏈DNA形成核酸蛋白復合物。該復合物通過尋找與目標DNA互補的區域進行雜交,以完成鏈置換反應,且此酶本身不具有核酸酶活性。產品應用方面,T4UvsX重組酶主要用于等溫擴增技術,如重組酶聚合酶擴增(RPA)技術。它在實驗中與T4UvsY重組酶、BsuDNA聚合酶(大片段)、T4基因32蛋白(gp32)等組分一同使用,以優化RPA擴增反應。T4UvsX重組酶的保存條件為-20℃,可保存3年,或者-20℃儲存有效期為2年,避免反復凍融。其儲存液通常包含Tris-HCl、KCl、DTT、EDTA和甘油等成分,以保持酶的穩定性和活性。熱失活處理為60℃孵育10分鐘。在使用T4UvsX重組酶時,需要注意其保存液中甘油含量較高,建議單獨分裝保存,并且在操作時穿著實驗服并佩戴一次性手套,以確保安全。此外,該產品供科研使用,不應用于臨床診斷。GPRC5D蛋白在宿主細胞內通過自組裝形成VLP。這一步驟通常在細胞內發生,以提高VLP的產量和質量。4S Green 核酸染色劑
通過測序或基于PCR的方法(如T7E1酶切和測序)來驗證gRNA的編輯效率,篩選出效率高的gRNA序列 。Recombinant Human TWEAK Receptor/TNFRSF12A
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中的逆轉錄酶(ReverseTranscriptase,RT)具有一個關鍵特性:它們通過特定的突變消除了RNaseH活性。RNaseH是一種通常與某些逆轉錄酶相關的酶活性,它能夠降解RNA。然而,在1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中,逆轉錄酶被設計成不具有這種降解RNA的能力,從而在合成cDNA的鏈時保護RNA模板不被降解。以下是1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)中逆轉錄過程的一般步驟,以及如何避免RNA降解:1.**RNA模板準備**:首先確保RNA模板的純度和完整性,避免DNA污染。可以通過DNaseI處理去除RNA樣品中的DNA污染。2.**混合反應組分**:將RNA模板、dNTPs(去氧核苷酸三磷酸)、逆轉錄引物(如oligo(dT)或隨機引物)和緩沖液混合。3.**逆轉錄酶添加**:加入經過突變處理的逆轉錄酶,這種酶缺乏RNaseH活性,因此不會在合成過程中降解RNA。4.**逆轉錄反應**:在適宜的溫度下進行逆轉錄反應,逆轉錄酶根據RNA模板合成cDNA鏈。5.**終止反應**:通過加熱至一定溫度來終止逆轉錄反應。Recombinant Human TWEAK Receptor/TNFRSF12A
Recombinant Human IL-17 Protein
Recombinant Cynomolgus NKG2D/CD314 Protein
Recombinant Human CD37 Protein
Recombinant Human TPO Protein
Recombinant Mouse LYPD3 Protein
Recombinant Human LILRB1/CD85j/ILT2 Protein
Recombinant Rat GFRAL/GFR alpha-like Protein
Recombinant Human ULBP-2 Protein
Recombinant Mouse LTBR Protein
Recombinant Canine CD46 Protein