重組酶聚合酶擴增技術(RecombinasePolymeraseAmplification,簡稱RPA)是一種核酸擴增技術,能夠在等溫條件下快速檢測特定DNA序列。這項技術以其快速、靈敏度高、特異性強、對設備要求低等優點,在臨床快速診斷、食品檢測、防控、工業應用、現場實時檢測等領域具有廣泛的應用潛力。**技術原理**:RPA技術主要依賴于幾種關鍵的酶和蛋白質:-**重組酶**:能夠識別并結合到單鏈核酸(寡核苷酸引物)上。-**單鏈DNA結合蛋白(SSB)**:與被置換的單鏈DNA結合,防止其重新結合形成雙鏈。-**鏈置換DNA聚合酶**:在引物定位同源序列后,進行鏈延伸,實現DNA的指數增長。RPA的工作原理是,重組酶與引物結合形成的蛋白-DNA復合物能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列,就會發生鏈交換反應形成并啟動DNA合成,對模板上的目標區域進行指數式擴增。整個過程進行得非常快,一般可在十分鐘之內獲得可檢出水平的擴增產物。**技術優勢**:-**快速性**:RPA可以在37-42°C的等溫條件下快速完成核酸的擴增,通常在10到30分鐘內即可完成。-**靈敏度和特異性**:RPA能夠檢測低至單拷貝的核酸模板,并具有高特異性。
5'DNA腺苷酰化試劑盒的單步反應是一種高效的酶促反應,用于在DNA分子的5'端添加一個腺苷酸(AMP)基團。這個過程通常涉及以下步驟:1.**準備反應混合物**:-根據試劑盒說明書,將所需的5'磷酸化的單鏈DNA(ssDNA或pDNA)、MthRNA連接酶(或其他腺苷酰化酶)、ATP和相應的緩沖液按比例混合。2.**孵育反應**:-將混合好的反應體系在指定的溫度(通常是65℃)下孵育一定的時間,以允許酶將ATP中的AMP部分轉移到DNA的5'端。3.**酶失活**:-反應完成后,通常在85℃孵育5分鐘以失活腺苷酰化酶,這一步是為了防止后續的去腺苷酰化現象,確保反應的穩定性。4.**產物收集**:-由于轉化效率高,通常不需要進行凝膠純化步驟。可以通過乙醇沉淀等方法收集腺苷酰化后的DNA產物。5.**產物應用**:-收集的腺苷酰化DNA可以直接用于后續的克隆、測序、連接或其他分子生物學實驗。6.**注意事項**:-確保所有操作在無RNA酶和無DNA酶的環境中進行,以避免污染。-使用時需注意反應體系的準確性,確保底物、酶和ATP的比例適當。單步反應的優勢在于簡化了操作流程,減少了樣品處理的復雜性,并且由于高轉化效率,避免了耗時的純化步驟,從而節省了時間和成本。Recombinant Mouse CD229/SLAMF3 Protein,His Tag來源于 Thermococcus kodakaraensis,具有高熱穩定性和校正能力,適用于長片段PCR和熱啟動PCR。
Benzonase核酸酶殘留檢測試劑盒的高重復性和準確性主要得益于以下幾個方面:1.**基于熒光探針的檢測方案**:該試劑盒使用熒光標記的DNA探針,當探針被Benzonase核酸酶切割時,會產生熒光信號,這種變化可以用來定量分析Benzonase的殘留量。此方法成功避免了ELISA檢測方法的一些限制,例如抗體的親和性能差異、非特異性反應以及蛋白濃度差異的問題。2.**高靈敏度**:試劑盒能夠檢測到低達約0.002U(約0.003ng)的Benzonase或BeyoZonase,樣品中的Benzonase濃度約為0.0002U/μl或0.3pg/μl,這為準確檢測提供了技術保障。3.**操作簡便快速**:檢測過程簡單,只需加入BenzDetectionSolution和待檢樣品,在定量PCR儀上15分鐘內即可完成檢測,減少了操作過程中可能出現的人為誤差。4.**標準曲線的建立**:試劑盒中提供了不同濃度的標準品,通過這些標準品可以建立標準曲線,從而準確計算出樣品中的Benzonase殘留量。5.**環境控制**:建議在超凈工作臺或生物安全柜等潔凈環境中進行檢測,以避免樣品受環境核酸酶的影響,保證檢測結果的準確性。
1st Strand cDNA Synthesis Kit(RNase H-)的逆轉錄過程是將RNA模板轉換成cDNA的過程。這個過程通常包括以下幾個步驟:模板RNA的準備:確保RNA模板的質量和純度,可能需要使用DNase I來去除RNA樣品中的DNA污染。逆轉錄反應體系的配制:根據試劑盒的說明,將RNA模板、引物(如Oligo(dT)、隨機六聚體或基因特異性引物)、dNTPs、逆轉錄酶和緩沖液等組分混合在一起。逆轉錄酶的啟用:如果需要,可能要將反應體系預熱到一定溫度以達到逆轉錄酶。逆轉錄反應:在適宜的條件下,逆轉錄酶會根據RNA模板合成一條互補的DNA鏈。這個過程通常在一定的溫度范圍內進行,以保證酶的活性和反應的效率。反應的終止:逆轉錄反應完成后,通常通過加熱到較高溫度來終止反應,以防止cDNA的進一步合成。產物的純化:合成的cDNA可能需要通過某些方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除未反應的dNTPs、RNA模板和酶等。cDNA的檢測和應用:合成的cDNA可以用于后續的PCR、qPCR、克隆、測序等實驗。Pfu DNA Polymerase 具有較高的保真度,能夠在DNA合成過程中減少錯誤摻入的堿基,降低非目標突變的發生率。
脫氧腺苷三磷酸(Deoxyadenosinetriphosphate,dATP)是一種去氧核苷酸三磷酸,它是DNA合成和復制過程中必需的原料之一。dATP的結構與腺苷三磷酸(ATP)相似,但dATP的五碳糖2號碳上缺少一個-OH基,取而代之的是一個氫原子。dATP是四種dNTPs(脫氧核糖核苷酸三磷酸)之一,四種dNTPs包括dATP、dCTP、dGTP和dTTP,它們分別對應DNA中的腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶。dATP的化學式為C10H16N5O12P3,分子量為491.182,CAS登錄號為1927-31-7。在實驗室中,dATP通常以100mM的濃度提供,用于各種分子生物學技術,如PCR、DNA測序和分子克隆技術。dATP溶液需要在低溫條件下保存,通常是-20℃,以保持其穩定性和活性。在DNA測序中,dATP與ddATP一起使用,ddATP是dATP的衍生物,它缺少3'-OH基團,用于Sanger測序中的鏈終止反應。在PCR中,dATP作為DNA聚合酶的底物,用于合成新的DNA鏈。dNTPs的濃度在PCR反應中非常重要,適當的濃度有助于減少錯配和提高擴增效率。通常,四種dNTPs以等濃度混合使用,以減少PCR過程中的錯配誤差。在某些情況下,根據目標序列的長度和組成,可能需要調整dNTPs的濃度,以優化PCR反應。GPRC5D蛋白在宿主細胞內通過自組裝形成VLP。這一步驟通常在細胞內發生,以提高VLP的產量和質量。Recombinant Human CDH17/Cadherin 17 Domain 7 Protein,hFc Tag
與Taq DNA Polymerase不同,Pfu DNA Polymerase產生的PCR產物為平滑末端,無3'端"A"突出。Recombinant Human Nectin-2/CD112 Protein,hFc Tag
1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)主要用于從RNA模板合成鏈cDNA,而不是直接用于線性RNA的放大。然而,合成的cDNA可以作為模板用于后續的線性RNA放大過程,這通常涉及以下幾個步驟:1.**cDNA合成**:使用1stStrandcDNASynthesisKit(RNaseH-)按照試劑盒的說明進行操作,從線性RNA模板合成鏈cDNA。2.**第二鏈cDNA合成**:在某些情況下,可能需要合成雙鏈cDNA。這可以通過使用DNA聚合酶和第二鏈合成試劑來完成,從而獲得完整的雙鏈cDNA。3.**線性RNA放大**:一旦獲得了cDNA,可以使用體外轉錄(IVT,InVitroTranscription)技術來放大RNA。這通常涉及以下步驟:-使用含有RNA聚合酶啟動子序列的特定引物對cDNA進行PCR擴增。-使用含有RNA聚合酶識別位點的引物進行體外轉錄反應,以合成大量RNA拷貝。4.**RNA純化**:體外轉錄產生的RNA需要通過適當的方法(如柱層析或沉淀)進行純化,以去除DNA模板、未反應的核苷酸和其他雜質。5.**RNA質量檢測**:使用凝膠電泳或生物分析儀檢測RNA的質量和大小,確保RNA的完整性和純度。Recombinant Human Nectin-2/CD112 Protein,hFc Tag