***做實(shí)驗(yàn)需要用正常的細(xì)胞摸索合適的細(xì)胞密度和培養(yǎng)時(shí)間，確定之后再加實(shí)驗(yàn)組，同時(shí)如果條件允許，設(shè)置一組已知高遷移性的細(xì)胞作陽性對(duì)照。注意細(xì)胞小室內(nèi)外培養(yǎng)基的比例，不要使小室外培養(yǎng)基超過小室內(nèi)培養(yǎng)基液面。觀察細(xì)胞時(shí)一定要擦去小室內(nèi)部貼在膜上的細(xì)胞。 默克提供的相關(guān)產(chǎn)品： Millicell?細(xì)胞培養(yǎng)小室：PET膜懸掛式或PCF膜站立式，膜孔徑為5 μM或8 μM 藥物跨內(nèi)皮細(xì)胞滲透性實(shí)驗(yàn) 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模? 研究某種藥物分子穿透內(nèi)皮細(xì)胞的滲透率上海益啟生物培養(yǎng)基訂購方便。靜安區(qū)培養(yǎng)小室細(xì)胞培養(yǎng)參數(shù)

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取上述200μL細(xì)胞液加入小室，下室（培養(yǎng)板）加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同，具體參考Millicell?產(chǎn)品說明書。37°C孵育24至72小時(shí)，依據(jù)**細(xì)胞類型而定。孵育結(jié)束，小心取出細(xì)胞小室，吸掉小室上層培養(yǎng)液，PBS清洗一遍，70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min，0.5%結(jié)晶紫（2%乙醇或PBS溶解）染色20min，然后進(jìn)行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料，立即用棉簽擦去濾膜上層的細(xì)胞，自然靜置風(fēng)干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細(xì)胞，隨機(jī)選取不同的視野計(jì)數(shù)并算平均值。結(jié)晶紫溶解濾膜下層細(xì)胞，然后用33%醋酸脫色，將結(jié)晶紫完全洗脫下來，洗脫液可在酶標(biāo)儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細(xì)胞穿透不均勻帶來的誤差。靜安區(qū)培養(yǎng)小室細(xì)胞培養(yǎng)參數(shù)

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