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來源: 發(fā)布時間:2025年04月10日

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取上述200μL細(xì)胞液加入小室,下室(培養(yǎng)板)加入900L含有10% FBS的培養(yǎng)基。不同規(guī)格的小室和培養(yǎng)板所加的體積不同,具體參考Millicell?產(chǎn)品說明書。37°C孵育24至72小時,依據(jù)**細(xì)胞類型而定。孵育結(jié)束,小心取出細(xì)胞小室,吸掉小室上層培養(yǎng)液,PBS清洗一遍,70%酒精或者4%多聚甲醛固定5min,0.5%結(jié)晶紫(2%乙醇或PBS溶解)染色20min,然后進(jìn)行第8步或者第9步。PBS清洗兩次以去除多余的染料,立即用棉簽擦去濾膜上層的細(xì)胞,自然靜置風(fēng)干。顯微鏡下觀察濾膜下層的細(xì)胞,隨機(jī)選取不同的視野計數(shù)并算平均值。結(jié)晶紫溶解濾膜下層細(xì)胞,然后用33%醋酸脫色,將結(jié)晶紫完全洗脫下來,洗脫液可在酶標(biāo)儀上570nm讀取OD值。這種方法可以避免視野下細(xì)胞穿透不均勻帶來的誤差。上海益啟,采購培養(yǎng)基的放心之選。

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