病毒RNA提取試劑盒可以快速從全血、血清、血漿、口腔拭子等生物液體中提取病毒RNA。在此試劑盒中,使用了核酸助沉劑--carrierRNA。核酸助沉劑不光有利于微量RNA的沉淀,同時(shí)也可以減少RNA的降解。本試劑盒操作簡捷方便。30-40min就可以完成一個(gè)樣品的提取,得到純凈的RNA。RNA可以使用RT-PCR,real-timeqPCR,Northernblot,Dotblot,poly(A)+selection,體外翻譯,和分子克隆等實(shí)驗(yàn)。此外,裂解液VLS也是病毒RNA樣品的一個(gè)很好的保存液。儲(chǔ)存在裂解液中的病毒RNA(在病毒樣品中加入3倍體積裂解液后劇烈渦旋裂解樣品)可以在-20℃情況下穩(wěn)定至2個(gè)月;在-80℃情況穩(wěn)定半年;同時(shí),儲(chǔ)存在裂解液中的樣品在運(yùn)輸過程中,也可以在4℃穩(wěn)定一日;-20℃穩(wěn)定一周。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板。鄭州正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷
總RNA提取試劑是廣譜型總RNA提取試劑。實(shí)驗(yàn)操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍普遍,可以從動(dòng)物組織、植物材料、各種微生物及培養(yǎng)細(xì)胞等樣品中提取總RNA。該方法對少量的組織(50-100mg)和細(xì)胞(5×106)以及大量的組織(≥1g)和細(xì)胞(>107)均有較好的分離效果。樣品在總RNA提取試劑中被充分裂解的同時(shí)能夠較大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會(huì)分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機(jī)相,RNA分布在上清層中。收集上清層后,經(jīng)異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學(xué)常規(guī)實(shí)驗(yàn),如RT-PCR、Real-timeRT-PCR、Northernblot、DotBlot、體外翻譯等。鄭州正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷RNA提取試劑注意事項(xiàng):為防止濺入眼睛,請戴防護(hù)眼鏡或使用透明保護(hù)屏。
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將一半的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。將剩下的一半溶液轉(zhuǎn)移到同一離心吸附柱中,12000rmp室溫離心半分鐘,棄穿透液。加0.7mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。加0.3mL通用洗柱液,室溫12000rmp離心半分鐘,棄穿透液。此步可以省略。室溫12000rmp離心半分鐘。此步十分重要,否則殘留的乙醇會(huì)影響RNA的使用。將離心吸附柱轉(zhuǎn)移到RNase-free收集管中,加入50~100μLRNA洗脫液,室溫放置1~2分鐘。12000rmp室溫離心半分鐘,離心管中溶液即為RNA樣品,可以立即使用或存放于-80℃待用
RNA提取注意事項(xiàng):1、組織樣本要盡可能的新鮮,避免反復(fù)凍融。2、提取時(shí)組織要充分研磨,組織量不宜過少,更不宜過多。3、加入裂解液后應(yīng)給予充分的孵育時(shí)間,使樣本充分裂解。4、在用Trizol法提取時(shí),分層后吸取上清的原則是“寧愿少吸,不能多吸”,千萬不能提取到中間層,否則會(huì)導(dǎo)致嚴(yán)重的基因組DNA污染。5、洗滌時(shí)洗滌液應(yīng)充分浸潤到管壁的四周,確保洗滌徹底。6、柱式提取法,洗滌完后除了對柱子進(jìn)行空離后,還應(yīng)當(dāng)將吸附柱置于超凈臺(tái)內(nèi)吹風(fēng)5~10min,使有機(jī)溶劑充分揮發(fā)干。7、柱式法較后洗脫時(shí)候,當(dāng)加入DEPC水后還應(yīng)孵育3~5min,或者提前將DEPC水加熱至60℃,可提高洗脫得率。傳統(tǒng)的Trizol裂解異丙醇沉淀法較后RNA是用DEPC水溶解沉淀,則應(yīng)當(dāng)給予適當(dāng)溶解時(shí)間,并用泵頭不斷吹吸離心管底部。能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶。
動(dòng)物細(xì)胞RNA提取:1、懸浮細(xì)胞:可直接離心后棄掉培養(yǎng)基,用無菌PBS清洗1~2遍后,再用適量PBS懸浮起來,然后再加入裂解液進(jìn)行裂解。千萬不要完全棄掉液體后,往沉淀細(xì)胞里直接加入裂解液,這樣會(huì)使外表層的細(xì)胞裂解后釋放的組蛋白包裹粘附在沉淀細(xì)胞外側(cè),從而限制沉淀內(nèi)部的細(xì)胞與裂解液的接觸,從而導(dǎo)致細(xì)胞裂解不徹底,降低RNA得率。2、半貼壁或貼壁不緊的細(xì)胞:棄掉培養(yǎng)基后,用PBS洗1~2次,然后直接吸取適量PBS用吸管或者泵吹打培養(yǎng)皿,把細(xì)胞吹下來,轉(zhuǎn)移到無RNA酶的EP管中,加裂解液進(jìn)行提取。為了使這種酶對降解的影響較小化,較好在采集時(shí)就穩(wěn)定好樣本中的 RNA。廣州RNA提取試劑廠家供應(yīng)
好的試劑盒價(jià)格比較貴,在實(shí)驗(yàn)室可以根據(jù)自己的實(shí)驗(yàn)需要來定奪試劑盒的使用。鄭州正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷
RNA抽取一般使用Trizol法抽提:Trizol是一種總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速裂解細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶活性。目前常用Trizol法進(jìn)行提取組織或細(xì)胞中的RNA。Trizol作用原理:在勻質(zhì)化或溶解樣品中,Trizol試劑可保持RNA的完整性,同時(shí)能破壞細(xì)胞及溶解細(xì)胞成分。加入氯仿離心后,裂解液分層成水相和有機(jī)相。RNA存在于水相中。水相轉(zhuǎn)移后,RNA通過異丙醇沉淀回收。移去水相后,用乙醇可從中間相沉淀得到DNA,加入異丙醇沉淀可從有機(jī)相得到蛋白質(zhì)。鄭州正規(guī)RNA提取試劑廠家直銷