胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化學(xué)小分子、核苷酸、某些鹽、低分子量蛋白質(zhì)、氨基酸、細(xì)胞因子、葡萄糖、殘留Antibiotic和其他外源分子。那么透析的效果如何?以及透析到何時(shí)呢?由于不可能監(jiān)測全部小分子,因此常選用葡萄糖為體現(xiàn)。血清中葡萄糖<5mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監(jiān)測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細(xì)監(jiān)測pH值和滲透壓。胎牛血清進(jìn)行動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。南通進(jìn)口胎牛血清哪家好
胎牛血清的作用:胎牛血清提供對維持細(xì)胞指數(shù)生長的Hormone,胎牛血清基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。胎牛血清提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,胎牛血清能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力。有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到釋放毒性作用。胎牛血清是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源。起酸堿度緩沖液作用。胎牛血清提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害。南通進(jìn)口胎牛血清哪家好胎牛血清應(yīng)用在哺乳動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中。
胎牛血清融化:胎牛血清在融化過程中,瓶子里冰塊的底部你會(huì)看見亮亮的蛋白絲在下沉,如同蜂蜜溶于水時(shí)的亮線,這就是血清中大量的蛋白在快速融化,而水的熔點(diǎn)高于蛋白,融化的速度是比蛋白慢的。(回想一下高級(jí)冰淇淋和大棒冰的區(qū)別,你懂得!)試想,如果采用4℃過夜的方法,1瓶500毫升的血清融化好,大約需要10小時(shí)左右,蛋白先融化,沉降在瓶子的底部,水融化的速度比蛋白慢,于是造成大量蛋白溶于少量的水,此時(shí)就很容易有一些蛋白飽和析出,(大多是脂蛋白和纖連蛋白),這就是血清融化中產(chǎn)生沉淀的重要原因之一。
如何挑選適合細(xì)胞生長的胎牛血清?原代或是正常細(xì)胞株建議使用BI特級(jí)胎牛血清,對生長條件要求高的細(xì)胞和干細(xì)胞可選用特級(jí)胎牛血清,或胚胎干細(xì)胞胎牛血清。由于血清有批間差異,細(xì)胞種類不同,我們建議客戶購買前可先申請?jiān)囉脴悠罚ㄟ^篩選得到滿意的血清批號(hào),之后根據(jù)項(xiàng)目需求可進(jìn)行批量囤貨,以保證該項(xiàng)目所需血清質(zhì)量的一致性,可排除不同批號(hào)血清對于實(shí)驗(yàn)帶來的影響。如何正確保存胎牛血清?需要長期保存的血清必須儲(chǔ)存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請勿超過1個(gè)月,若一次無法用完一瓶,建議將血清無菌分裝并冷凍。有些情況下胎牛血清結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到釋放毒性作用。
為什么要熱滅活胎牛血清?胎牛血清加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。開啟的補(bǔ)體參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,開啟淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細(xì)胞,昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí),推薦使用熱滅活胎牛血清。為什么儲(chǔ)存在冰箱中的胎牛血清會(huì)出現(xiàn)少量沉淀?胎牛血清沒有預(yù)老化,儲(chǔ)存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會(huì)影響血清的質(zhì)量。推薦在-20℃儲(chǔ)存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。南通進(jìn)口胎牛血清哪家好
胎牛血清是血液凝固后的液體部分,不含血細(xì)胞、纖維蛋白及凝集因子等。南通進(jìn)口胎牛血清哪家好
胎牛血清的處理方法主要有以下幾種:1.活性炭處理,活性炭可以與親脂性分子結(jié)合,因此已用于從FBS中去除Hormone,例如雄雌二醇、孕酮、皮質(zhì)醇、睪酮、三碘甲狀腺原氨酸(T3)和甲狀腺素(T4)。這些血清脂質(zhì)Hormone傾向于干擾免疫測定系統(tǒng)和胰島素測定方法。2.透析,透析可以從FBS中去除所有分子量小于10,000MW的分子。這包括極性和非極性分子。去除細(xì)胞因子、葡萄糖、氨基酸和許多其他物質(zhì)。透析還可以去除FBS中的Antibiotic和其他外源性分子。南通進(jìn)口胎牛血清哪家好
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