胎牛血清融化方法:只要2.5個小時,溫和有效地加快了水融化的速度,另一方面,融化過程中可以間斷輕輕搖擺瓶子,讓蛋白在瓶中混勻。此方法不但節(jié)約了時間,而且較大限度減少了血清沉淀出現(xiàn)的幾率。血清融化過程中,蛋白質會比水先融化。冰塊底部亮亮的細絲就是融化中的蛋白,血清在培養(yǎng)細胞中,比較重要的是利用它的活性的因子,因此,融化過程中較大限度地保留因子的活性,就變得非常重要。回憶一下,細胞復蘇時,要保持細胞的活性,我們是要遵循“快融”原則還是“慢融”原則呢?快融!血清同樣如此!三步法需要兩個半小時,4℃過夜需要大約10個小時(冰箱一般設2-8℃,所以各實驗室融化時間會稍有出入)。胎牛血清在無菌條件下要經(jīng)過0.1微米膜三重過濾,要進行一系列的檢測。上海標準血清哪里有賣
胎牛血清在細胞培養(yǎng)中的作用:1.提供對維持細胞指數(shù)生長的Hormone,基礎培養(yǎng)基中沒有或量很少的營養(yǎng)物,以及主要的低分子營養(yǎng)物。2.提供結合蛋白,能識別維生素、脂類、金屬和其他Hormone等,能結合或調節(jié)它們所結合的物質活力。3.有些情況下結合蛋白質能與有毒金屬和熱原質結合,起到釋放毒性作用。4.是細胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質上所需因子來源。5.起酸堿度緩沖液作用。6.提供蛋白酶抑制劑,使在細胞傳代時使剩余胰蛋白酶失活,保護細胞不受傷害。7.參與細胞凍存。在細胞培養(yǎng)中,胎牛血清加入基礎培養(yǎng)基的濃度大多為5%~20%(常見為10%)的。具體到不同試驗,應依據(jù)文獻報導,或細胞類型或基礎培養(yǎng)基的成分來確定較佳濃度。胎牛血清應在-20℃儲存,運輸應干冰冷鏈運輸,避免反復凍融,確保血清中因子活性不受影響,保證血清優(yōu)良品質。上海標準血清哪里有賣胎牛血清保存需要避免陽光的照射,需要用恒溫冰箱來進行保存。
如何挑選適合細胞生長的胎牛血清?原代或是正常細胞株建議使用BI特級胎牛血清,對生長條件要求高的細胞和干細胞可選用特級胎牛血清,或胚胎干細胞胎牛血清。由于血清有批間差異,細胞種類不同,我們建議客戶購買前可先申請試用樣品,通過篩選得到滿意的血清批號,之后根據(jù)項目需求可進行批量囤貨,以保證該項目所需血清質量的一致性,可排除不同批號血清對于實驗帶來的影響。如何正確保存胎牛血清?需要長期保存的血清必須儲存于-20℃冰箱(未開封血清有效期為5年)。若存放于4℃,請勿超過1個月,若一次無法用完一瓶,建議將血清無菌分裝并冷凍。
如何區(qū)別真假胎牛血清:1、血紅蛋白,標準為不高于20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高,反之,數(shù)值越低。2、pH,國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關,這也能用來初步鑒別血清的來源。3、微生物。包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性的病毒等。隨著國內(nèi)血清廠家生產(chǎn)條件的改善提高,細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制,支原體經(jīng)過0.1um過濾,大多也能清理。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的,主要是生產(chǎn)環(huán)境過程中帶入,又無法過濾,很難徹底清理,但對血清質量影響不大。病原性的病毒,特別是BVDV,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,這類微生物是影響國產(chǎn)血清質量的重要因素之一,而進口胎牛血清中基本都控制的很好。胎牛血清適合脈沖示蹤實驗(同位素標記研究細胞代謝)適合轉染CHO后的篩選。
用于體外細胞培養(yǎng)的胎牛血清及其制備方法:將已存放血漿的試管置入-20~0℃環(huán)境下保存?zhèn)溆茫粚⒀獫{分離提取胎牛血清,具體步驟如下:取6-12g氯化鈉、0.1-0.5g磷酸二氫鉀和1.4-2.4g磷酸二氫鉀放入容器中,向其中加入300-700mL去離子水,攪拌均勻,使用質量分數(shù)為10-20%的鹽酸溶液調節(jié)pH為7.0-7.3,將上述所收集的血漿倒入容器中,攪拌均勻,溫度設定為25-38℃,靜置8-20min,得混合液C;22)將上述的混合液C放入離心機中離心分離8-20min,轉速設定為3000-10000r/min,取上清液。胎牛血清是由胎牛血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復雜的混合物。上海標準血清哪里有賣
胎牛血清含有一些小分子物質,如氨基酸、糖類、脂類及Hormone類物質。上海標準血清哪里有賣
胎牛血清的生產(chǎn)工藝:透析胎牛血清,顧名思義,需經(jīng)過透析。它是在4°C下用特定的透析膜對血清在0.15MNaCl中透析。由于該透析膜只允許10kDa以下的小分子穿過,在滲透壓的作用下,這些小分子便從血清中滲析到透析膜外的NaCl溶液中。10kDa以下的小分子有化學小分子、核苷酸、某些鹽、低分子量蛋白質、氨基酸、細胞因子、葡萄糖、殘留Antibiotic和其他外源分子。那么透析的效果如何?以及透析到何時呢?由于不可能監(jiān)測全部小分子,因此常選用葡萄糖為體現(xiàn)。血清中葡萄糖<5mg/dL,即可以停止透析了。透析過程中,除監(jiān)測葡萄糖濃度外(可采用葡萄糖氧化酶方法測定),還需仔細監(jiān)測pH值和滲透壓。上海標準血清哪里有賣
上海司鼎生物科技有限公司主營品牌有司鼎;OriCell,發(fā)展規(guī)模團隊不斷壯大,該公司服務型的公司。司鼎生物是一家有限責任公司(自然)企業(yè),一直“以人為本,服務于社會”的經(jīng)營理念;“誠守信譽,持續(xù)發(fā)展”的質量方針。公司始終堅持客戶需求優(yōu)先的原則,致力于提供高質量的免疫印跡(WB)技術服務,熒光定量PCR技術服務,膜片鉗電生理技術服務,在體光纖成像記錄技術服務。司鼎生物順應時代發(fā)展和市場需求,通過高端技術,力圖保證高規(guī)格高質量的免疫印跡(WB)技術服務,熒光定量PCR技術服務,膜片鉗電生理技術服務,在體光纖成像記錄技術服務。